【摘要】：藍狐(學名Alopex lagopus),又稱北極狐,屬于食肉目犬科動物,主要分布于北美洲北部,亞歐大陸的高緯度地區(qū)以及北冰洋與西伯利亞南部。藍狐是珍貴的毛皮動物之一,在我國被廣泛飼養(yǎng),藍狐養(yǎng)殖是我國特種養(yǎng)殖的支柱產(chǎn)業(yè)之一。近幾年出現(xiàn)的藍狐僵化癥,俗稱僵狐病,不僅嚴重影響到狐貍的健康,而且死亡率較高,即使存活也難以成長為標準商品狐,對養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟效益造成極大影響。目前認為,僵狐病的發(fā)病涉及遺傳、營養(yǎng)、腸道菌群失調(diào)和免疫異常等因素,而且腸道內(nèi)致病菌與正常菌群比例失調(diào)可能是其發(fā)病的觸發(fā)點。眾所周知,腸道微生物菌群與宿主的健康息息相關,它對宿主食物的消化、內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的代謝、抵御致病菌的入侵等起著不可替代的作用。試驗一為了探究僵狐腸道菌群的變化,根據(jù)細菌16S r DNA序列設計雙歧桿菌、乳酸菌、大腸桿菌、腸球菌的引物,對健康狐與僵狐腸道中的4種細菌菌屬占腸道總菌的比例進行測定分析。收集30只僵狐、30只健康狐的糞便標本提取DNA,應用實時熒光定量PCR技術對兩組藍狐腸道菌群中的4種細菌的比例進行測定,對比僵狐與正常狐腸道中4種細菌數(shù)量的變化。結果表明:患病僵狐相對于健康狐而言,雙歧桿菌和乳酸菌占腸道總菌(16S r DNA)數(shù)量的比例顯著降低(P0.05),而腸球菌所占比例相比顯著升高(P0.05),大腸桿菌的比例變化不明顯(P0.05)。試驗二旨在通過在飼料中添加乳酸菌添加劑,改善僵狐腸道微環(huán)境。研究不同水平的乳酸菌添加劑對僵狐營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響,確定乳酸菌添加劑在僵狐日糧中的適宜添加量。將120只2月齡患病僵狐隨機分成4個處理組,每組30只。試驗I、II、III組在基礎日糧中分別添加3%、5%、7%的乳酸菌添加劑,對照組為基礎日糧,試驗進行45 d。結果表明:試驗I、II、III組與對照組相比日采食量均有所提高,但差異均不顯著(P0.05);日增重分別提高12.94%、19.75%、14.73%,差異均顯著(P0.05);料肉比II組最低,II組和III組顯著低于對照組(P0.05)。試驗I、II、III組與對照組相比粗脂肪的消化率分別提高19.03%、18.51%、17.22%,差異均顯著(P0.05),試驗II組與對照組相比粗蛋白質(zhì)的消化率提高7.43%,差異顯著(P0.05),鈣和總磷的消化率差異均不顯著(P0.05)。綜上所述:患病僵狐的腸道菌群比例發(fā)生異常變化,提示腸道菌群失調(diào)可能是僵狐病的觸發(fā)因素之一。乳酸菌添加劑會對腸道微生態(tài)起到一定的調(diào)節(jié)改善作用,日糧中添加乳酸菌制劑能提高僵狐的消化代謝,且本試驗以添加5%乳酸菌添加劑為宜。
【圖文】：

取的 DNA 經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進行完整性檢測，結果由圖 3-1 可以看出，，提取的 DNA 條帶較亮，而且 DNA 條帶上沒有出現(xiàn)雜帶，表明提取的 DNA 分子保持完整。圖3-1 利用試劑盒對腸道菌群DNA進行提取的電泳圖（部分樣品截圖）Fig. 3-1 Electrophoresis is figure of Intestinal microbial DNA extracted Kit利用細菌 16S rDNA的通用引物對提取的基因組 DNA進行檢測，通過 PCR從提取的 DNA中擴增出的腸道總菌 16S rDNA 序列的長度在 1500 bp 左右，見圖 3-2，通過條帶可以看出，擴增出的片段長度與試驗預計擴增的片段長度一致，并且擴增效果穩(wěn)定，重復性好。檢測結果充分說明，利用試劑盒提取的腸道總菌的基因組 DNA 可以進行后續(xù)的分子生物學試驗。

圖 3-2 腸道細菌 16SrDNA PCR 擴增結果電泳圖Fig. 3-2 PCR amplification of Intestinal bacteria 16SrDNA群 DNA 的 Real-Time PCR 產(chǎn)物的電泳檢測脂糖凝膠電泳對Real-Time PCR產(chǎn)物進行檢測的結果見下um）、乳酸菌（Lactic acid bacteria）、大腸桿菌（Esche）、總細菌基因的擴增片段的電泳結果，每種菌引物的電健康對照狐的糞便樣本，每個引物的Real-Time PCR擴增且擴增得到的目的片段均呈一條的亮帶，沒有雜帶和拖的基因組DNA都可用于Real-Time PCR。
【學位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S858.92

【參考文獻】

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本文編號：2561651