【摘要】：吞噬作用是一種對抗微生物病原體的重要機制,但許多細菌均有抗吞噬作用。利用透射電鏡和激光共聚焦顯微鏡結(jié)合細胞生物學(xué)技術(shù),對黑腹果蠅Drosophila melanogaster S2細胞吞噬熱滅活大腸埃希菌(heat inactivated Escherichia coli,HIEC)和熱滅活金黃葡萄球菌(heat inactivated Staphylococcus aureus,HISA)的作用進行了研究。結(jié)果表明:S2細胞能夠在接種后1 d內(nèi)有效清除HIEC,但不能清除HISA;經(jīng)聚肽糖(PG)或脂多糖(LPS)激活的S2細胞同樣不能有效地清除HISA,HISA能夠在S2細胞內(nèi)至少存活4 d。在接種細胞酸性指示劑(p Hrodo)標(biāo)記的細菌1h后,HIEC處于酸化環(huán)境中,而HISA沒有;檢測S2細胞的吞噬百分率顯示S2細胞吞入活細菌與滅活細菌的敏感度沒有顯著差異。PG處理后的S2細胞防御素(defensin)與抗真菌肽(drosomycin)均顯著上調(diào)表達,但仍無法消化HISA。結(jié)果證實:滅活金黃葡萄球菌表面具有抑制吞噬作用中消化步驟的成分,而滅活大腸埃希菌沒有。研究揭示了在S2細胞對抗革蘭氏陽性菌時,吞噬作用在清除該類病原體時所起到的重要作用以及金黃葡萄球菌抑制消化過程從而抵御細胞吞噬的策略。
【圖文】：

2細胞吞噬熱滅活大腸桿菌HIEC1h后，胞內(nèi)可觀察到HIEC發(fā)出的綠色熒光（圖3A）；吞噬發(fā)生1d后，S2細胞內(nèi)觀察不到綠色熒光粒子（圖3B）；表明HIEC已經(jīng)被S2細胞清除。同樣處理下，熱滅活金黃葡萄球菌HISA沒有被S2細胞清除。由圖3C和圖3D可知，HISA被吞噬后，，被S2細胞內(nèi)化到細胞內(nèi)繼續(xù)存在。由此可知，在S2細胞接種滅活菌后，HIEC與HISA均被S2細胞吞入，但HIEC被S2細胞清除，而HISA則沒有被清除。2.3流式細胞儀檢測S2細胞對HIEC或HISA的吞噬作用流式細胞儀的檢測結(jié)果由圖4可知：接種1h后，吞入了至少1個HIEC粒子的S2細胞在所有S2圖1透射電鏡觀察黑腹果蠅S2細胞對HIEC或HISA的吞噬作用Figure1TransmissionelectronmicroscopyofphagocytosisofHIECorHISAbyS2cellsA.S2細胞吞噬HIEC（孵育后1h）；B.S2細胞吞噬HIEC（孵育后1d）；C.S2細胞吞噬HISA（孵育后1h）；D.S2細胞吞噬HISA（孵育后1d）。箭頭指示胞內(nèi)的HISA。圖2透射電鏡觀察黑腹果蠅S2細胞對HISA的吞噬作用Figure2TransmissionelectronmicroscopyofphagocytosisofHISAbyS2cellsA.HISA；B.S2細胞吞噬HISA（孵育后1d）；C.S2細胞吞噬HISA（孵育后2d）；D.S2細胞吞噬HISA（孵育后3d）；E.S2細胞吞噬HISA（孵育后4d）；F.LPS激活S2細胞吞噬HISA（孵育后4d）；G.PG激活S2細胞吞噬HISA；H.PG激活S2細胞（孵育后4d），胞內(nèi)HISA被內(nèi)化。箭頭指示胞內(nèi)的HISA。圖3激光共聚焦顯微鏡觀察黑腹果蠅S2細胞對FITC標(biāo)記的HIEC或HISA的吞噬作用Figure3ConfocalmicroscopyofphagocytosisofFITC-labeledHIECorHISAbyS2cellsA.S2細胞吞噬HIEC（孵育后1h）；B.S2細胞吞噬HIEC（孵育后1d）；C.S2細胞吞噬HISA（孵育后1h）；D.S2細胞吞噬HISA（孵育后1d）。綠色熒光表示胞內(nèi)滅活菌（HIEC或HISA），藍色熒光表示細胞核，紅色熒

由此可知，在S2細胞接種滅活菌后，HIEC與HISA均被S2細胞吞入，但HIEC被S2細胞清除，而HISA則沒有被清除。2.3流式細胞儀檢測S2細胞對HIEC或HISA的吞噬作用流式細胞儀的檢測結(jié)果由圖4可知：接種1h后，吞入了至少1個HIEC粒子的S2細胞在所有S2圖1透射電鏡觀察黑腹果蠅S2細胞對HIEC或HISA的吞噬作用Figure1TransmissionelectronmicroscopyofphagocytosisofHIECorHISAbyS2cellsA.S2細胞吞噬HIEC（孵育后1h）；B.S2細胞吞噬HIEC（孵育后1d）；C.S2細胞吞噬HISA（孵育后1h）；D.S2細胞吞噬HISA（孵育后1d）。箭頭指示胞內(nèi)的HISA。圖2透射電鏡觀察黑腹果蠅S2細胞對HISA的吞噬作用Figure2TransmissionelectronmicroscopyofphagocytosisofHISAbyS2cellsA.HISA；B.S2細胞吞噬HISA（孵育后1d）；C.S2細胞吞噬HISA（孵育后2d）；D.S2細胞吞噬HISA（孵育后3d）；E.S2細胞吞噬HISA（孵育后4d）；F.LPS激活S2細胞吞噬HISA（孵育后4d）；G.PG激活S2細胞吞噬HISA；H.PG激活S2細胞（孵育后4d），胞內(nèi)HISA被內(nèi)化。箭頭指示胞內(nèi)的HISA。圖3激光共聚焦顯微鏡觀察黑腹果蠅S2細胞對FITC標(biāo)記的HIEC或HISA的吞噬作用Figure3ConfocalmicroscopyofphagocytosisofFITC-labeledHIECorHISAbyS2cellsA.S2細胞吞噬HIEC（孵育后1h）；B.S2細胞吞噬HIEC（孵育后1d）；C.S2細胞吞噬HISA（孵育后1h）；D.S2細胞吞噬HISA（孵育后1d）。綠色熒光表示胞內(nèi)滅活菌（HIEC或HISA），藍色熒光表示細胞核，紅色熒光表示肌動蛋白。×100。384

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