發(fā)布時(shí)間：2019-11-13 20:44

【摘要】：賈第蟲(chóng)(Giardia)和隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium)是重要的人獸共患寄生性原蟲(chóng),主要傳播途徑包括直接接觸或攝入污染的食物和飲水而感染,嚴(yán)重威脅著動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育,給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失,同時(shí),也潛在地威脅著人類(lèi)健康。針對(duì)賈第蟲(chóng)病和隱孢子蟲(chóng)病,尚未研發(fā)出有效的藥物和疫苗。掌握奶牛賈第蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)的感染情況、流行特點(diǎn)及種/基因型分布等可為防控奶牛賈第蟲(chóng)病和隱孢子蟲(chóng)病提供基本依據(jù)。本研究選擇了甘肅省和寧夏回族自治區(qū)3個(gè)地市的19個(gè)奶牛場(chǎng),于2012年11月至2014年03月采集了不同年齡階段的奶牛的糞便樣品,對(duì)奶牛賈第蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)感染情況進(jìn)行調(diào)查研究,并對(duì)賈第蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)分離株進(jìn)行分子鑒定和基因分型研究。1.采用福爾馬林-乙酸乙酯沉淀法、盧戈氏碘液染色法和飽和蔗糖溶液漂浮法等方法對(duì)采集到的2945份奶牛糞便樣品進(jìn)行顯微鏡檢測(cè),并采用分子生物學(xué)方法對(duì)鏡檢為陽(yáng)性樣品及疑似陽(yáng)性樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,107份樣品呈賈第蟲(chóng)陽(yáng)性的,隱孢子蟲(chóng)陽(yáng)性樣品為150份,賈第蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)感染率分別為3.63%和5.09%;賈第蟲(chóng)在春季的感染率最高,為5.79%,而隱孢子蟲(chóng)則在秋季感染率最高,為6.96%;在年齡方面,3月齡及以下的奶牛的賈第蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)感染率最高,分別為10.45%和14.01%。2.為掌握奶牛賈第蟲(chóng)的遺傳特征,通過(guò)對(duì)107個(gè)賈第蟲(chóng)分離株進(jìn)行分子鑒定,采用巢式P CR方法特異性擴(kuò)增TPI基因,測(cè)定序列,并在NCBI核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)上進(jìn)行Blast檢索,應(yīng)用Clustal X軟件比對(duì)序列以及應(yīng)用Mega軟件構(gòu)建分子進(jìn)化樹(shù),以期闡明所分離的賈第蟲(chóng)種類(lèi)和基因型關(guān)系。結(jié)果表明:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為530bp,與預(yù)期結(jié)果相一致。進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果顯示107個(gè)分離株均為腸賈第蟲(chóng)(Giardia intestinalis),但序列之間存在差異性,其中1個(gè)分離株屬于聚集體A,106個(gè)分離株屬于聚集體E。3.同樣,對(duì)隱孢子蟲(chóng)分離株進(jìn)行分子生物學(xué)方法鑒定,采用PCR方法擴(kuò)增SSU rRNA基因,并對(duì)所得序列進(jìn)行測(cè)序和比對(duì)分析。PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示目的片段大小為830bp。序列分析發(fā)現(xiàn)在150份奶牛糞便樣品中分離到36株為安氏隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium andersoni),24株為芮氏隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium ryanae),70株為牛隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium bovis)和20株為微小隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium parvum),其中以C.bovis感染率最高。4.此外,利用MLST技術(shù)對(duì)奶牛C.andersoni分離株進(jìn)行亞型分析。20個(gè)分離株被成功分型,主要為2個(gè)MLST亞型,即A4,A4,A4,A1和A5,A4,A2,A1。甘肅省奶牛C.andersoni的遺傳多樣性較寧夏回族自治區(qū)更為明顯。綜上所述,本次對(duì)西北部分地區(qū)奶牛賈第蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)感染情況調(diào)查顯示感染主要以犢牛(3月齡及以下)為主,但感染季節(jié)存在差異性,賈第蟲(chóng)以春季感染為主,而隱孢子蟲(chóng)以秋季感染為主。隱孢子蟲(chóng)感染主要以C.bovis最為常見(jiàn),且C.andersoni具有遺傳多樣性特征;感染奶牛的賈第蟲(chóng)則以G.intestinalis為主。推測(cè)主要因幼年動(dòng)物免疫系統(tǒng)不健全等原因,其抗賈第蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)能力相對(duì)較弱。應(yīng)加強(qiáng)對(duì)上述疾病的防治。
【圖文】：

圖 2-1 賈第蟲(chóng)形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果（400×）注：A：包囊；B：滋養(yǎng)體Fig.2-1 Morphological observations of Giardia（400×）Note：A: oocyst; B: trophczoite.1.2 隱孢子蟲(chóng)卵囊形態(tài)特征由圖 2-2 可以看出，，經(jīng)飽和蔗糖溶液漂浮法后，可觀察到隱孢子蟲(chóng)卵囊呈橢圓形

19圖 2-2 飽和蔗糖溶液漂浮法檢測(cè)隱孢子蟲(chóng)結(jié)果（400×）ination of Cryptosporidium oocysts by saturated sucrose solution flo
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S858.23

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本文編號(hào)：2560479