【摘要】：賈第蟲(Giardia)和隱孢子蟲(Cryptosporidium)是重要的人獸共患寄生性原蟲,主要傳播途徑包括直接接觸或攝入污染的食物和飲水而感染,嚴(yán)重威脅著動(dòng)物生長發(fā)育,給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失,同時(shí),也潛在地威脅著人類健康。針對賈第蟲病和隱孢子蟲病,尚未研發(fā)出有效的藥物和疫苗。掌握奶牛賈第蟲和隱孢子蟲的感染情況、流行特點(diǎn)及種/基因型分布等可為防控奶牛賈第蟲病和隱孢子蟲病提供基本依據(jù)。本研究選擇了甘肅省和寧夏回族自治區(qū)3個(gè)地市的19個(gè)奶牛場,于2012年11月至2014年03月采集了不同年齡階段的奶牛的糞便樣品,對奶牛賈第蟲和隱孢子蟲感染情況進(jìn)行調(diào)查研究,并對賈第蟲和隱孢子蟲分離株進(jìn)行分子鑒定和基因分型研究。1.采用福爾馬林-乙酸乙酯沉淀法、盧戈氏碘液染色法和飽和蔗糖溶液漂浮法等方法對采集到的2945份奶牛糞便樣品進(jìn)行顯微鏡檢測,并采用分子生物學(xué)方法對鏡檢為陽性樣品及疑似陽性樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,107份樣品呈賈第蟲陽性的,隱孢子蟲陽性樣品為150份,賈第蟲和隱孢子蟲感染率分別為3.63%和5.09%;賈第蟲在春季的感染率最高,為5.79%,而隱孢子蟲則在秋季感染率最高,為6.96%;在年齡方面,3月齡及以下的奶牛的賈第蟲和隱孢子蟲感染率最高,分別為10.45%和14.01%。2.為掌握奶牛賈第蟲的遺傳特征,通過對107個(gè)賈第蟲分離株進(jìn)行分子鑒定,采用巢式P CR方法特異性擴(kuò)增TPI基因,測定序列,并在NCBI核酸序列數(shù)據(jù)庫上進(jìn)行Blast檢索,應(yīng)用Clustal X軟件比對序列以及應(yīng)用Mega軟件構(gòu)建分子進(jìn)化樹,以期闡明所分離的賈第蟲種類和基因型關(guān)系。結(jié)果表明:PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為530bp,與預(yù)期結(jié)果相一致。進(jìn)化樹分析結(jié)果顯示107個(gè)分離株均為腸賈第蟲(Giardia intestinalis),但序列之間存在差異性,其中1個(gè)分離株屬于聚集體A,106個(gè)分離株屬于聚集體E。3.同樣,對隱孢子蟲分離株進(jìn)行分子生物學(xué)方法鑒定,采用PCR方法擴(kuò)增SSU rRNA基因,并對所得序列進(jìn)行測序和比對分析。PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示目的片段大小為830bp。序列分析發(fā)現(xiàn)在150份奶牛糞便樣品中分離到36株為安氏隱孢子蟲(Cryptosporidium andersoni),24株為芮氏隱孢子蟲(Cryptosporidium ryanae),70株為牛隱孢子蟲(Cryptosporidium bovis)和20株為微小隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum),其中以C.bovis感染率最高。4.此外,利用MLST技術(shù)對奶牛C.andersoni分離株進(jìn)行亞型分析。20個(gè)分離株被成功分型,主要為2個(gè)MLST亞型,即A4,A4,A4,A1和A5,A4,A2,A1。甘肅省奶牛C.andersoni的遺傳多樣性較寧夏回族自治區(qū)更為明顯。綜上所述,本次對西北部分地區(qū)奶牛賈第蟲和隱孢子蟲感染情況調(diào)查顯示感染主要以犢牛(3月齡及以下)為主,但感染季節(jié)存在差異性,賈第蟲以春季感染為主,而隱孢子蟲以秋季感染為主。隱孢子蟲感染主要以C.bovis最為常見,且C.andersoni具有遺傳多樣性特征;感染奶牛的賈第蟲則以G.intestinalis為主。推測主要因幼年動(dòng)物免疫系統(tǒng)不健全等原因,其抗賈第蟲和隱孢子蟲能力相對較弱。應(yīng)加強(qiáng)對上述疾病的防治。
【圖文】：

圖 2-1 賈第蟲形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果（400×）注：A：包囊；B：滋養(yǎng)體Fig.2-1 Morphological observations of Giardia（400×）Note：A: oocyst; B: trophczoite.1.2 隱孢子蟲卵囊形態(tài)特征由圖 2-2 可以看出，，經(jīng)飽和蔗糖溶液漂浮法后，可觀察到隱孢子蟲卵囊呈橢圓形

19圖 2-2 飽和蔗糖溶液漂浮法檢測隱孢子蟲結(jié)果（400×）ination of Cryptosporidium oocysts by saturated sucrose solution flo
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.23

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本文編號(hào)：2560479