發(fā)布時間：2019-11-06 13:19

【摘要】：【目的】自然界中噬菌體種類繁多,其裂菌功能在針對細菌耐藥方面具有潛在應用價值。不同噬菌體也呈現(xiàn)出顯著的基因多樣性及宿主特異性。從上海某豬場仔豬腸內(nèi)容物樣品中分離、純化大腸桿菌的裂解性噬菌體,分析其生物學特性和病毒學特征,為探索應用噬菌體治療細菌性感染提供研究材料�！痉椒ā坎捎秒p層瓊脂平板法分離、純化噬菌體,觀察噬菌斑特征,通過電鏡觀察噬菌體形態(tài)特征,測定其裂菌譜、最佳感染復數(shù)、一步生長曲線和生物學特性,進行噬菌體全基因組測序和遺傳進化分析。【結果】分離、純化獲得一株能高效裂解大腸桿菌K-12菌株的噬菌體,命名為v B_Eco S_SH2(SH2),噬菌斑呈圓形、大而透明、邊緣整齊。電鏡觀察SH2的頭部呈二十面體立體對稱,尾部較長。噬菌體的潛伏期為10 min,暴發(fā)期為60 min,裂解量高達121 PFU/感染細胞,其最佳感染復數(shù)為0.1�；蚪M測序和比對結果表明,SH2的核酸類型為ds DNA,基因組全長為49 088 bp,G+C%含量為45%,Gen Bank登錄號為KY985004,結合電鏡觀察及BLASTp分析,確定其屬于有尾噬菌體目長尾噬菌體科成員。同源性及進化分析表明,該噬菌體為大腸桿菌T1樣噬菌體的新成員�！窘Y論】分離鑒定了一株裂解效率極高的大腸桿菌T1樣噬菌體,并確認其為T1樣噬菌體新成員,為研究大腸桿菌噬菌體及其抗菌應用提供了新的實驗材料。
【圖文】：

SH2全基因組序列進行組裝。利用RAST(RapidAnnotationusingSubsystemTechnology)和BASys(BacterialAnnotationSystem)在線注釋進行全基因組注釋。使用NCBIBLAST在線工具進行序列相似性比對分析，并構建噬菌體尾絲蛋白序列的進化樹。2結果與分析2.1大腸桿菌噬菌體的分離鑒定2.1.1噬菌體的分離及噬菌斑特征：仔豬腸內(nèi)容物樣品過濾上清與大腸桿菌K-12菌株MC1061混合后，經(jīng)雙層瓊脂平板法測定和純化，37°C培養(yǎng)6h后，在平板上能形成明顯噬菌斑。噬菌斑呈圓形、大而透明且邊緣整齊，呈現(xiàn)出裂解性噬菌體的噬菌斑特征(圖1)。2.1.2噬菌體的電鏡觀察：純化的噬菌體經(jīng)磷鎢酸負染后，在透射電鏡下所觀察到的形態(tài)如圖2所示。噬菌體vB_EcoS_SH2的頭部呈二十面體立體對稱，頭部直徑約50nm，噬菌體含非收縮性尾部，，寬約8nm、長約120nm。根據(jù)2012年國際病毒分類委員會第9次報告提出的噬菌體分類與命名標準，該噬菌體符合長尾噬菌體科(Siphoviridae)特征。圖1噬菌體SH2噬菌斑形態(tài)特征Figure1MorphologicalfeatureofphageSH2plaque圖2噬菌體SH2電鏡照片F(xiàn)igure2ElectronmicrographofphageSH22.1.3噬菌體的裂菌譜：通過平板裂解實驗及點板實驗(Spottestassay)檢測噬菌體對實驗菌株的裂解效果。結果發(fā)現(xiàn)，該噬菌體對大腸桿菌K-12菌株MC1061、MG1655和DM1187具有極強的裂解效果，形成明顯的裂菌圈。對大腸桿菌O157菌株Min27，部分APEC和AFEC菌株，金黃色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213及豬鏈球菌HA9801均沒有明顯的裂解效果(表1)。表1噬菌體SH2宿主范圍Table1HostrangeofphageSH2菌株類型Straintype菌株編號No.ofstrains裂菌活性Lyticactivity大腸桿菌K-12菌株(4株)E.coliK-12strains(4)MC1061+++MG1655+++DM1187+++

acterialAnnotationSystem)在線注釋進行全基因組注釋。使用NCBIBLAST在線工具進行序列相似性比對分析，并構建噬菌體尾絲蛋白序列的進化樹。2結果與分析2.1大腸桿菌噬菌體的分離鑒定2.1.1噬菌體的分離及噬菌斑特征：仔豬腸內(nèi)容物樣品過濾上清與大腸桿菌K-12菌株MC1061混合后，經(jīng)雙層瓊脂平板法測定和純化，37°C培養(yǎng)6h后，在平板上能形成明顯噬菌斑。噬菌斑呈圓形、大而透明且邊緣整齊，呈現(xiàn)出裂解性噬菌體的噬菌斑特征(圖1)。2.1.2噬菌體的電鏡觀察：純化的噬菌體經(jīng)磷鎢酸負染后，在透射電鏡下所觀察到的形態(tài)如圖2所示。噬菌體vB_EcoS_SH2的頭部呈二十面體立體對稱，頭部直徑約50nm，噬菌體含非收縮性尾部，寬約8nm、長約120nm。根據(jù)2012年國際病毒分類委員會第9次報告提出的噬菌體分類與命名標準，該噬菌體符合長尾噬菌體科(Siphoviridae)特征。圖1噬菌體SH2噬菌斑形態(tài)特征Figure1MorphologicalfeatureofphageSH2plaque圖2噬菌體SH2電鏡照片F(xiàn)igure2ElectronmicrographofphageSH22.1.3噬菌體的裂菌譜：通過平板裂解實驗及點板實驗(Spottestassay)檢測噬菌體對實驗菌株的裂解效果。結果發(fā)現(xiàn)，該噬菌體對大腸桿菌K-12菌株MC1061、MG1655和DM1187具有極強的裂解效果，形成明顯的裂菌圈。對大腸桿菌O157菌株Min27，部分APEC和AFEC菌株，金黃色葡萄球菌ATCC25923和ATCC29213及豬鏈球菌HA9801均沒有明顯的裂解效果(表1)。表1噬菌體SH2宿主范圍Table1HostrangeofphageSH2菌株類型Straintype菌株編號No.ofstrains裂菌活性Lyticactivity大腸桿菌K-12菌株(4株)E.coliK-12strains(4)MC1061+++MG1655+++DM1187+++BL21+++禽大腸桿菌(5株)APEC&AFECstrains(5)APEC-2APEC-15AFEC-8AFEC-52APEC-63

【相似文獻】

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1 汪昌保;沙門氏菌噬菌體fmb-p1生物學特性與噬菌機制及其在冷藏食品中的應用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2016年

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1 劉莉;副豬嗜血桿菌自轉(zhuǎn)運蛋白AT1的功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2011年

本文編號：2556729