【摘要】：為了解廣州地區(qū)的貓細(xì)小病毒的生物學(xué)特性,本實(shí)驗(yàn)通過對收集的11份糞便樣品進(jìn)行PCR鑒定以及對鑒定結(jié)果為陽性的糞便樣品進(jìn)行血凝實(shí)驗(yàn)、理化特性實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞分離鑒定實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,從11份糞便樣品中通過PCR方法鑒定出2份陽性的糞便樣品。2份陽性的糞便樣品均能凝集1%的豬紅細(xì)胞,且血凝效價(jià)為1:128。使用F81細(xì)胞對2份陽性糞便樣品進(jìn)行病毒分離,結(jié)果顯示編號FPV-GZ01的糞便樣品在F81細(xì)胞上出現(xiàn)細(xì)胞病變,成功分離出FPV,編號FPV-GZ02糞便樣品未分離到FPV,這可能與糞便中的病毒含量有關(guān)。病毒的理化特性結(jié)果顯示,FPV能夠耐酸、堿、加熱以及脂溶劑,但對具有DNA細(xì)胞毒性的物質(zhì)不耐受。為了解廣州地區(qū)貓細(xì)小病毒的自然重組、跨宿主傳播以及流行變異情況,通過采集疑似感染貓細(xì)小病毒的糞便病料進(jìn)行PCR鑒定,對陽性糞便樣品提取基因組DNA,用PCR方法擴(kuò)增獲得病毒全基因組序列,并與GenBank中相關(guān)的參考毒株序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,同時(shí)對VP2基因與NS1基因主要氨基酸位點(diǎn)進(jìn)行差異分析。結(jié)果表明,成功獲得2個(gè)貓細(xì)小病毒的全基因組序列。核苷酸系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示,廣州地區(qū)貓細(xì)小病毒FPV-GZ01、FPV-GZ02與我國其它分離毒株FPV-XJ01、FPVHRB屬同一分支,且提示FPV-GZ01、FPV-GZ02由FPV-XJ01進(jìn)化而來;NS1基因的核苷酸系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示,FPV存在與CPV-447重組的可能;主要氨基酸位點(diǎn)分析顯示,FPV在VP2基因中主要氨基酸位點(diǎn)的遺傳變異比CPV保守;在NS1基因上發(fā)現(xiàn)FPV-GZ01、FPV-GZ02分別存在不同程度的氨基酸位點(diǎn)突變。為了解廣州地區(qū)貓細(xì)小病毒的感染性和致病性,本實(shí)驗(yàn)采用口服病毒的方法,使用FPV-GZ01細(xì)胞分離毒株對幼貓進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,感染FPV的幼貓出現(xiàn)了體溫升高發(fā)熱的現(xiàn)象,其中1只實(shí)驗(yàn)組幼貓出現(xiàn)典型的雙相熱特征;體重變化方面,實(shí)驗(yàn)組幼貓均出現(xiàn)體重不斷下降的情況,表明感染FPV能夠?qū)е掠棕埵秤陆?精神萎靡,體重減輕;FPV-GZ01能夠引起不同程度的組織損傷,其中主要的病變部位在胃腸道組織,FPV主要侵染胃腸道組織的黏膜上皮細(xì)胞,造成細(xì)胞變性、壞死、脫落。此外,FPV對貓具有較大的危害,能引起感染幼貓的死亡。本實(shí)驗(yàn)通過廣州地區(qū)貓細(xì)小病毒的分離鑒定、遺傳進(jìn)化分析以及動物實(shí)驗(yàn)方面的研究,為了解該地區(qū)貓細(xì)小病毒的流行情況提供參考,也為研究貓細(xì)小病毒的對貓的感染性和致病性奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

pLBVector限制性酶切圖譜

PCRR產(chǎn)物克隆的的操作流程程
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S858.293

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2554677