【摘要】：目的：通過(guò)將兔肝球蟲(chóng)接種至兔肝細(xì)胞中并在體外進(jìn)行培養(yǎng),從而獲得兔肝球蟲(chóng)病的發(fā)病病原即斯氏艾美爾球蟲(chóng)。為進(jìn)一步研究斯氏艾美爾球蟲(chóng)的生活史、致病性以及針對(duì)此病的防治藥物和疫苗提供必要的前提條件。方法：將經(jīng)過(guò)驅(qū)蟲(chóng)處理的幼兔致死后取出肝臟,進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng),獲得穩(wěn)定的原代細(xì)胞后,再轉(zhuǎn)接到24孔培養(yǎng)板中；同時(shí)對(duì)從長(zhǎng)治肉兔養(yǎng)殖場(chǎng)采集的病變肝臟,經(jīng)分離純化獲得雜質(zhì)較少的球蟲(chóng)卵囊后,對(duì)其進(jìn)行孢子化培養(yǎng),待孢子化率達(dá)到85%以上時(shí),用機(jī)械研磨的方法對(duì)其進(jìn)行破壁,分離子孢子；隨后將分離的球蟲(chóng)子孢子接種到已長(zhǎng)滿培養(yǎng)孔底部的兔肝原代細(xì)胞中,觀察其增殖情況,以獲得斯氏艾美爾球蟲(chóng)卵囊；隨后將卵囊接種到健康幼兔體內(nèi)中,對(duì)其致病力進(jìn)行驗(yàn)證并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果:(1)兔肝原代細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：致死兔子后不放血的操作,較易獲得兔肝原代細(xì)胞。在培養(yǎng)約16h后出現(xiàn)零星的貼壁,約4-5d后出現(xiàn)穩(wěn)定的生長(zhǎng)情況,經(jīng)20d左右的培養(yǎng)以及機(jī)械刮除干擾細(xì)胞后,可獲得活力較高的兔肝原代細(xì)胞。(2)斯氏艾美爾球蟲(chóng)卵囊孢子化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在濃度為2.5%的重鉻酸鉀溶液中,卵囊孵化的最佳溫度為32℃,經(jīng)過(guò)約5d可使斯氏艾美爾球蟲(chóng)卵囊孢子化率達(dá)到85%以上。(3)接種斯氏艾美爾球蟲(chóng)子孢子至細(xì)胞培養(yǎng)板的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：剛接種斯氏艾美爾球蟲(chóng)子孢子時(shí),子孢子在顯微鏡下呈現(xiàn)中部稍微凹陷似彎曲的香蕉狀；約1h后子孢子的部分結(jié)構(gòu)已進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,1.5h后子孢子已全部進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部；最初幾天無(wú)明顯變化,直至15d后在鏡下發(fā)現(xiàn)多量灰白發(fā)亮的球蟲(chóng)體,部分肝細(xì)胞皺縮、脫落；在28d時(shí)已可見(jiàn)到結(jié)構(gòu)完整的球蟲(chóng)卵囊,在34d時(shí)兔肝細(xì)胞大部分脫落與球蟲(chóng)卵囊懸浮于細(xì)胞培養(yǎng)液中。(4)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：將經(jīng)2.5%的重鉻酸鉀溶液培養(yǎng)后的斯氏艾美爾球蟲(chóng)卵囊接種到幼兔體內(nèi),1d后糞便開(kāi)始出現(xiàn)卵囊,9-13d時(shí)達(dá)到高峰。此時(shí)幼兔均出現(xiàn)了程度不一的臨床癥狀,剖解后發(fā)現(xiàn)肝臟均存在不同程度的體積增大,肝表面及實(shí)質(zhì)內(nèi)有大量白色或淡黃色結(jié)節(jié),其他內(nèi)臟器官無(wú)明顯病理變化。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)對(duì)斯氏艾美爾球蟲(chóng)分離純化方法進(jìn)行了改進(jìn)和綜合,獲得了試驗(yàn)所需的雜質(zhì)較少的斯氏艾美爾球蟲(chóng)卵囊和子孢子。之后將兔肝細(xì)胞作為載體,在體外成功獲得了具有侵襲力的斯氏艾美爾球蟲(chóng)卵囊。
【圖文】：

圖１斯氏艾美爾球蟲(chóng)卵囊逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１邋Ｏｏｃｙｓｔｓ邋ｏｆ邋Ｓｔｅｉｎｍａｎ打邋Ｅｉｍｅｒｉａ逡逑斯氏艾美爾球蟲(chóng)的抱子生殖階段，其抱子等人的研究報(bào)道則認(rèn)為是３４護(hù)６＂＾８１。在殖體可分為Ａ、Ｂ兩型或Ｈ型。洪凌仙肯定其裂殖生殖的代數(shù)。據(jù)現(xiàn)有資料記載，，的小配子體直徑為邋２０－２５＾ｍｌ，小配子發(fā)排列Ｗ后趨向四周，因其有２根鞭毛，因的線狀結(jié)構(gòu)靠近核處１５２１。大配子周圍有＾多與雞球蟲(chóng)大配子類似的成囊壚粒結(jié)構(gòu)，察，可見(jiàn)大配子無(wú)微管，表面微孔的長(zhǎng)和家兔致病性研究逡逑旅成因其主要寄生于家兔的肝臟、膽管

端稍圓壁薄。接種７ｄ時(shí)排出卵襄的數(shù)量明顯X椉櫻苑啾憔導(dǎo)煒杉罅康那虺媛壓義細(xì)�。随后几天卵囊数量急究濣w櫻匝閩D３中的幼兔到９ｄ時(shí)卵裹排出數(shù)量幾乎為接種逡逑６ｄ時(shí)排出量的２．５倍。由圖１０可見(jiàn)，排出的卵裹數(shù)量在此期間內(nèi)快速上升且與接種斯逡逑－２５－逡逑
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.7

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5 張寶祥;;防治兔艾美爾球蟲(chóng)病的有效藥物[J];國(guó)外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1984年11期

6 B.A.логкареб,高龍;海貍鼠艾美爾球蟲(chóng)病的治療[J];毛皮動(dòng)物飼養(yǎng);1994年04期

7 楊繼宗，廖光佩，郭成華，馬世澤，曾有清，洪岳樣，候?qū)W云，金滔弟，李方來(lái)，戚小偉，陳方華，陳英宏，曹美華，王榮發(fā)，陸引法，楊連夫;浙江省家兔球蟲(chóng)種類的調(diào)查研究[J];中國(guó)養(yǎng)兔雜志;1994年02期

8 湯勝民 ,高明輝;海貍鼠艾美爾球蟲(chóng)病的治療經(jīng)驗(yàn)[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);1995年06期

9 韓先桂;山羊的艾美爾球蟲(chóng)病[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2001年08期

10 韓先桂 ,王佩良;一起山羊艾美爾球蟲(chóng)病[J];畜牧與獸醫(yī);2002年01期

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2 徐家華;覃中華;廖申全;謝明權(quán);李安興;蔡建平;;禽艾美球蟲(chóng)一種肌動(dòng)蛋白解聚因子的表達(dá)和鑒定[A];第五屆廣東、湖南、江西、湖北四省動(dòng)物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

3 菅復(fù)春;張龍現(xiàn);寧長(zhǎng)申;白曉輝;姚雷;趙紅玉;仇書(shū)興;;鄭州市動(dòng)物園野豬寄生蟲(chóng)感染情況調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

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3 石家莊華盛獸藥服務(wù)部 孫桂芹;雛雞易感疾病介紹[N];河北科技報(bào);2014年

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9 叢培君;雞堆型艾美爾球蟲(chóng)乳酸脫氫酶增強(qiáng)型核酸疫苗構(gòu)建和免疫保護(hù)研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

10 劉兆輝;E.maxima ADF基因亞單位疫苗與核酸疫苗的免疫保護(hù)性研究[D];吉林大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2549608