【摘要】：Musclin是一種具有調(diào)節(jié)肌肉生長發(fā)育和代謝功能的生物活性因子,由Nishizawa等于2004年通過信號序列示蹤技術從小鼠骨骼肌中發(fā)現(xiàn)。對于M Musclin基因轉錄調(diào)控機制的研究,特別是綿羊Musclin基因啟動子區(qū)各種重要順式作用元件的功能研究,尚未見詳盡系統(tǒng)的研究報道。本課題組在前期研究中,已經(jīng)通過生物信息學分析在綿羊Musclin基因啟動子區(qū)發(fā)現(xiàn)了一些潛在的重要元件。因此,本試驗旨在進一步通過突變分析和EMSA技術研究這些順式作用元件的作用,以為揭示Musclin基因的轉錄調(diào)控機制奠定基礎。本試驗在課題組前期已經(jīng)克隆的綿羊Musclin基因啟動子序列的基礎上，采用將所要研究的順式作用元件序列突變?yōu)槊盖形稽c的方法,分別設計引物擴增,并進一步以EGFP為報告基因，，構建了一系列肌肉相關潛在元件(包括E-box、GA-box、MEF2、 MEF3、FoxO、HMTB、SMAD、VTBP)突變的Musclin基因啟動子表達載體MUSCLINproXM-EGFP。將構建好的元件突變載體分別轉染小鼠C2C12成肌細胞系,熒光顯微鏡觀察表明元件突變后對該啟動子轉錄調(diào)控活性存在不同程度的影響。EGFP的熒光定量PCR結果顯示：E-box系列(E1～E8)中,除了E2和E8元件突變后使Musclin啟動子轉錄活性上調(diào)外,其它E-box突變均使Musclin啟動子轉錄活性下調(diào);其它元件中,除了GA-box突變使Musclin啟動子轉錄活性下調(diào)外,MEF2、MEF3、FoxO、HMTB. SMAD和VTBP元件突變均使啟動子轉錄活性上調(diào)。為了對這些元件進行更加深入的探究,選取了E-box、FoxO、VTBP、SMAD、HMTB、 MEF3元件進行了EMSA試驗,結果表明：在綿羊肌肉組織提取的核蛋白中,確實存在能夠與E1, E2, E5, E8, FoxO, HMTB, SMAD這些順式作用元件相結合的反式作用因子,進一步確證了這些元件在Musclin基因啟動子轉錄調(diào)控中的重要作用。
【學位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S826

【參考文獻】

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本文編號：2547296