發(fā)布時(shí)間：2019-10-01 15:11

【摘要】：本研究通過(guò)運(yùn)用LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬構(gòu)建免疫應(yīng)激模型,探究斷奶仔豬應(yīng)激狀態(tài)下機(jī)體炎癥、細(xì)胞增殖和凋亡進(jìn)程,從多角度分析仔豬應(yīng)激過(guò)程的免疫機(jī)能及狀態(tài),進(jìn)一步解析和理解仔豬免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。本試驗(yàn)研究中50頭斷奶仔豬隨機(jī)均分成LPS組和對(duì)照組,LPS組每天腹腔注射LPS(100μg/kg bw)一次,對(duì)照組注射等體積生理鹽水,試驗(yàn)持續(xù)13天。在試驗(yàn)第1、4、7、10和13天,每組各選5頭仔豬宰殺、采血、稱(chēng)重及收集脾臟組織,全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)血常規(guī),Elisa法檢測(cè)血清促炎性細(xì)胞因子水平,觀察分析仔豬大體形態(tài)特征和脾臟指數(shù)。取一份脾臟組織于4%多聚甲醛中固定,經(jīng)脫水、透明、包埋、切片程序后制成5μm厚切片,HE染色后觀察脾臟組織形態(tài),IHC和光密度半定量分析技術(shù)探討IL-1β、IL-6、TNF-α、Skp2、P27~(Kip1)、Caspase-3蛋白分布表達(dá),TUNELPOD染色后觀察凋亡細(xì)胞分布規(guī)律。另取一份脾臟組織液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱,QRT-PCR技術(shù)檢測(cè)Skp2及P27~(Kip1)轉(zhuǎn)錄水平。本試驗(yàn)中LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬應(yīng)激模型中主要結(jié)果如下:①試驗(yàn)初期LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬嘔吐腹瀉、食欲降低、體溫上升,中期癥狀改善,后期癥狀消失;②LPS應(yīng)激后斷奶仔豬脾重及指數(shù)明顯增大,尤其是第10天;③LPS應(yīng)激后會(huì)外周血細(xì)胞成分發(fā)生變化,細(xì)胞數(shù)量和比例發(fā)生顯著變化;④LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬的第4、7、10天,脾臟組織生發(fā)中心明顯、脾小結(jié)增多、PALS增厚;⑤LPS應(yīng)激后促炎性細(xì)胞因子濃度發(fā)生顯著變化,第1天血清和脾臟中IL-1β、IL-6表達(dá)水平上升,第4、7、10天血清和脾臟IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)水平下降;⑥LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬第4、7、10天,Skp2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增多、密集分布于脾小結(jié)、邊緣區(qū)、PALS,主要是淋巴細(xì)胞;⑦LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬第7、10天,脾臟Skp2轉(zhuǎn)錄翻譯活動(dòng)增強(qiáng)、P27~(Kip1)轉(zhuǎn)錄翻譯活動(dòng)減弱,兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān);⑧LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬第4、7天,脾臟Caspase-3蛋白表水平下降、凋亡細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞凋亡進(jìn)程受阻。上述結(jié)果表明斷奶仔豬脾臟可通過(guò)自身免疫系統(tǒng)抵御LPS侵襲,維持脾臟正常組織結(jié)構(gòu)、確保生理功能運(yùn)行。主要體現(xiàn):促炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α合成分泌受到抑制,限制脾臟炎癥強(qiáng)度避免組織損傷;Skp2轉(zhuǎn)錄翻譯水平升高,參與脾臟淋巴細(xì)胞增殖分化,增強(qiáng)機(jī)體免疫;凋亡蛋白Caspase-3活性抑制,脾臟細(xì)胞凋亡進(jìn)程受阻。
【圖文】：

圖 1-2-1 LPS 結(jié)構(gòu)模式圖Fig.1-2-1 The molecular structure model of LPS與哺乳動(dòng)物細(xì)胞一樣，，一層膜（囊膜）所包裹著細(xì)菌表面、可維持微生物形狀完整性。以革蘭氏陰性菌為例，流感嗜血桿菌、大腸桿菌、腸道沙門(mén)氏菌、霍亂弧菌布氏桿菌、銅綠假單胞菌、鸚鵡熱衣原體的囊膜是由雙層不對(duì)稱(chēng)的組織膜所構(gòu)成，

圖2-2-1 LPS誘導(dǎo)斷奶仔豬臨床癥狀Fig.2-2-1 LPS induced clinical symptoms of weaned piglets注：A，試驗(yàn)第1天對(duì)照組仔豬臨床癥狀；B、C，試驗(yàn)第1天LPS組仔豬臨床癥狀；D、F，試驗(yàn)第4天；E，試驗(yàn)第7天；G、H，試驗(yàn)第10天；I，LPS重復(fù)注射對(duì)仔豬體溫的影響，同一日齡對(duì)照組與LPS組進(jìn)行差異性比較，*表示差異顯著P<0.05，**表示差異極顯著P<0.01。Note: A, clinical symptoms of weaned piglets treated by saline on day 1; B, C, clinical symptoms of
【學(xué)位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

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1 賈安峰;馮京海;張敏紅;李澤陽(yáng);常玉;徐勝勝;何川;;遞增注射脂多糖誘導(dǎo)慢性免疫應(yīng)激對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響[J];動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2015年06期

2 孟愛(ài)宏;凌亦凌;張霄鵬;;p38 MAPK和STAT3參與CCK-8抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠促炎癥細(xì)胞因子生成[J];中國(guó)病理生理雜志;2013年06期

3 高超;華子春;;細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法新進(jìn)展[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2011年05期

4 趙瑞杰;李引乾;王會(huì);王廣彬;娜日蘇;金大鵬;關(guān)偉軍;馬月輝;;Caspase家族與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J];中國(guó)畜牧雜志;2010年17期

5 佟俊杰;張廣耘;袁曉;;細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J];口腔醫(yī)學(xué);2010年07期

6 馬文峰;周小舟;孫新鋒;黃俏光;周大橋;;生脈散對(duì)急性肝衰竭大鼠內(nèi)毒素誘導(dǎo)細(xì)胞因子水平的影響[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2009年01期

7 劉玉蘭;魯晶;石君霞;范偉;;豬免疫應(yīng)激研究進(jìn)展[J];畜牧與獸醫(yī);2008年02期

8 李建文;陳代文;張克英;龍定彪;;免疫應(yīng)激對(duì)仔豬理想氨基酸平衡模式影響的研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2006年01期

9 余冰,陳代文,張克英;試論免疫應(yīng)激對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)的影響[J];飼料博覽;2002年01期

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1 張養(yǎng)東;脂多糖對(duì)泌乳奶牛乳脂肪和乳蛋白影響及其機(jī)理研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

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2 游純波;不同氨基酸和免疫增強(qiáng)劑的互作對(duì)保育豬生長(zhǎng)發(fā)育及免疫應(yīng)激性能的影響[D];廣西大學(xué);2014年

3 劉聰;LPS對(duì)母兔子宮中不同部位TLR2，TLR4及其免疫相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 李武林;免疫應(yīng)激對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫功能及盲腸微生物區(qū)系的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2544492