【摘要】：在輔助生殖技術(shù)(ART)過程中卵母細(xì)胞發(fā)育潛力的評(píng)估越來越受到關(guān)注。生產(chǎn)實(shí)踐應(yīng)用上,最佳卵母細(xì)胞成熟質(zhì)量的選擇和鑒定,將有助于提高生產(chǎn)胚胎比率和卵母細(xì)胞的冷凍保存的效果。取卵過程中卵泡液(FF)或壁層顆粒細(xì)胞容易獲得,是理論上最優(yōu)的非傷害性的評(píng)價(jià)卵母細(xì)胞發(fā)育潛力生化指標(biāo)的來源。然而,目前還沒找到可以作為衡量卵母細(xì)胞發(fā)育潛力的可靠標(biāo)志物質(zhì)的分子來預(yù)測(cè)卵母細(xì)胞的發(fā)育與妊娠。因此,本研究目的是尋找能評(píng)價(jià)豬卵母細(xì)胞發(fā)育潛力標(biāo)志分子的物質(zhì)。鈉肽系統(tǒng),包括鈉肽片段(NPs)和相應(yīng)的同源受體(NPR)在幾個(gè)物種中抑制卵母細(xì)胞減數(shù)分裂來控制卵母細(xì)胞的核成熟,然而,NPs與豬卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力關(guān)系并不清楚。本研究發(fā)現(xiàn):直徑為3.0 - 8.0 mm卵泡的顆粒細(xì)胞中NPR2的mRNA水平一直保持穩(wěn)定的表達(dá),而NPPB和NPPC的mRNA水平隨著卵泡直徑的增加而增加。在直徑3.0 - 6.0 mm的卵泡的卵泡液中BNP和CNP的濃度分別為52 - 58 ng/ml和36 - 43 ng/ml,但是到了直徑6.1 - 8.0 rmm的卵泡BNP和CNP的濃度則顯著下降,分別為44 ng/ml和35 ng/ml。與此相一致的是,直徑3.0-6.0 mm卵泡的卵母細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)再經(jīng)IVF后的卵裂率和囊胚率隨卵泡直徑增大而增加,但是卵泡直徑為6.1 - 8.0 mm的卵母細(xì)胞的卵裂率和囊胚率則呈現(xiàn)下降趨勢(shì);發(fā)生卵裂的單個(gè)卵母細(xì)胞的卵泡中的BNP和CNP維持在特定濃度(BNP: 45 - 65ng/ml, CNP: 30-45ng/ml)。由此可見鈉肽片段的水平對(duì)維持卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力起到重要作用,可以作為衡量較大卵泡的卵母細(xì)胞發(fā)育潛力的標(biāo)志物。進(jìn)一步研究表明:100 ng/ml BNP/CNP不同濃度的組合對(duì)體外培養(yǎng)的卵母細(xì)胞具有相似的減數(shù)分裂抑制作用;NPs對(duì)不同直徑分類卵泡的卵母細(xì)胞的影響是不同的,卵母細(xì)胞成熟前培養(yǎng)添加BNP或CNP能夠提高來自3.0 - 6.0 mm卵泡的卵母細(xì)胞的卵裂率和囊胚率,但是不能提高來自6.1-8.0 mm卵泡的卵母細(xì)胞的卵裂率和囊胚率。值得注意的是,與對(duì)照組相比,通過孤雌激活(PA)和IVF不同的實(shí)驗(yàn)都證實(shí)來源于3.0 - 4.0 mm的卵泡卵母細(xì)胞在含有100 ng/ml的BNP或CNP前成熟培養(yǎng)基中培養(yǎng)20小時(shí)卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力提高2-3倍(P0.001)。因此,前成熟培養(yǎng)添加NPs有助于提高來源于豬3.0 - 4.0 mm卵泡的卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)體外培養(yǎng)的卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力。此外,我們用流式細(xì)胞儀鑒定了不同卵泡中顆粒細(xì)胞中生長(zhǎng)激素受體(GHR)蛋白表達(dá)情況,證實(shí)了其基因與蛋白的表達(dá)與卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力相關(guān)聯(lián),GHR可以同時(shí)作為反映卵母細(xì)胞發(fā)育潛力的標(biāo)志分子。
【圖文】：

卵細(xì)胞內(nèi)高水平的ｃＡＭＰ可以使ＣＤＫ１上的Ｔｈｒｌ４和Ｔｙｒｌ５位發(fā)生磷酸化，從而影逡逑響ＣＤＫ１與周期蛋白Ｂ邋（ＣｙｄｉｎＢ邋）形成復(fù)合體，即成熟促進(jìn)因子，從而使卵母細(xì)胞的維持在減逡逑數(shù)分裂阻滯狀態(tài)（Ｄｕｃｋｗｏｒｔｈ邋ｅｔａｌ．，２００２）（圖１－２）。當(dāng)ｃＡＭＰ水平下降時(shí)，上述位點(diǎn)會(huì)發(fā)生去磷逡逑酸化從而形成復(fù)合物ＭＰＦ，從而使卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂阻滯狀態(tài)恢復(fù)。另外Ｑ／Ｃ２５６基因敲除逡逑小鼠的卵母細(xì)胞不能夠激活ＭＰＦ而且卵母細(xì)胞不成熟。相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，磷脂酶ＣＤＣ２５和激酶逡逑ＷＥＥ１／ＭＹＴ１也能使卵母細(xì)胞內(nèi)ＣＤＫ１去磷酸化從而使卵母細(xì)胞成熟。因此它們也被證明參與了逡逑卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯（Ｄｕｃｋｗｏｒｔｈ邋ｅｔ邋ａｌ．，２００２；邋Ｓａｅｋｉ邋ｅｔ邋ａｌ．，，１９９９ａ）。逡逑／邐：＊ｃＡＭＰ＊；＊．邐＼逡逑／邋？？：；？？？？？邐＼逡逑／邐ＰＫＡ逡逑／邋＼逡逑ＷＥＥ１／ＭＹＴ１邋ＣＤＣ２５ｂ－＜Ｐ）逡逑oQ‘，ＭｐＦ”ｙ逡逑Ｍｅｉｏｔｉｃ邋Ａｒｒｅｓｔ逡逑圍１－２邋ｃＡＭＰ抑制卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)的可能的機(jī)制（引自Ｌｉｓａ邋ＭＭｅｈｌｍａｎｎ，邋２００５）逡逑２？次黃嘿呤（Ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ，ＨＸ）逡逑卵母細(xì)胞內(nèi)的ｃＡＭＰ是影響卵母細(xì)胞成熟最主要的分子，其在卵母細(xì)胞內(nèi)的含最降低致使卵逡逑母細(xì)胞的減數(shù)分裂恢復(fù)。而ＰＤＥ３Ａ已被證明在卵母細(xì)胞內(nèi)特異性降解ｃＡＭＰ從而引發(fā)卵母細(xì)胞逡逑的成熟。實(shí)驗(yàn)衣明在卵

中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文邐第一章文獻(xiàn)綜述逡逑圖１－．；鈉肽阻滯卵母細(xì)胞成熟（引自Ｚｈａｎｇ，邋２０１４）逡逑ｌ．ｌ＿４ＨＸ，ＯＭｌ，ＣＮＰ三者之間的關(guān)系逡逑目盼認(rèn)為在卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯中起著重要作用的三種物質(zhì)ＨＸ，邋ＯＭＩ，ＣＮＰ。ＨＸ邋＋身特逡逑忭決定其沒有種屬特異忭，而Ｒ．Ｋ能抑制ＰＤＥ３Ａ的活忭，在卵泡液內(nèi)也能檢測(cè)到蘇存在，因此逡逑ＨＸ在生理情況下是抑制卵母細(xì)胞成熟的重要抑制物。但是從卵泡液內(nèi)除去ＨＸ，卵泡液內(nèi)依舊逡逑有－－種能抑制卵母細(xì)胞成熟的物質(zhì)，科學(xué)家稱為ＯＭＩ。ＯＭＩ沒有種屬特異性，是一種分子量約２逡逑ＫＤ的小分子肽，由顆粒細(xì)胞分泌到卵泡液內(nèi)作用到卵丘細(xì)胞抑制卵母細(xì)胞成熟。非常有意思的逡逑是近年發(fā)現(xiàn)的ＣＮＰ產(chǎn)生的ｃＧＭＰ能非常好的抑制ＰＤＥ３Ａ的活性。ＣＮＰ沒有種屬特異性。人，逡逑小鼠
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S814

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 黃德寶,胡建宏,李青旺,馮濤,丁海榮,楊智青,董文素;豬卵巢重量與卵母細(xì)胞質(zhì)量的相關(guān)性研究[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年08期

2 周佳勃;吳延光;韓東;劉麗清;譚秀文;劉娜;羅明玖;常仲樂;譚景和;;精子和卵母細(xì)胞質(zhì)量控制對(duì)山羊卵胞質(zhì)內(nèi)精子注射(ICSI)受精的影響[J];實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào);2004年05期

本文編號(hào)：2532468