【摘要】：本研究旨在探討低氧環(huán)境對水牛脂肪干細(xì)胞增殖及其生物學(xué)特性維持的影響。I型膠原酶從水牛頸部脂肪組織中分離得到水牛脂肪干細(xì)胞(buffalo adipose-derived stem cells,bASCs),然后檢測分析bASCs在低氧(5%O_2)和常氧(20%O_2)培養(yǎng)條件下的細(xì)胞形態(tài)和集落形成情況,增殖與凋亡基因的表達情況,成纖維細(xì)胞生長因子(Basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)和血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)的分泌量。同時,檢測分析經(jīng)低氧和常氧培養(yǎng)條件連續(xù)傳代的bASCs間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)標(biāo)志基因和多能性相關(guān)基因表達情況,探討低氧環(huán)境下 HIF-1(hypoxia induced factor-1)通路、bFGF 和VEGF對bASCs增殖的影響及其機理。研究取得如下結(jié)果。(1)0.1%Roche I型膠原酶分離所得的原代bASCs在接種4 h后開始貼壁。48h后顯微鏡下觀察細(xì)胞呈多邊形和類成纖維細(xì)胞形態(tài)的梭型,并呈旋渦狀生長。bASCs在低氧環(huán)境中連續(xù)傳代后仍呈立體的類梭子形態(tài),而在常氧條件下傳至P9后呈松散趨勢,少量細(xì)胞有空泡。低氧培養(yǎng)的bASCs增殖速率及集落數(shù)顯著高于常氧(P0.05)。低氧顯著上調(diào)bASCs促增殖基因KI-67、抗凋亡基因Bcl-2、生長因子相關(guān)基因bFGF和VEGFR-1的表達(P0.05),且顯著下調(diào)促凋亡基因Caspase-3、Bax的表達(P0.05)。低氧顯著促進bASCs分泌生長因子bFGF、VEGF(P0.05)。(2)在低氧環(huán)境下抑制bFGF相關(guān)通路,bASCs的增殖受到抑制,HIF-1α的表達和bFGF、VEGF的分泌下降;抑制HIF-1α的表達,細(xì)胞增殖、bFGF和VEGF的表達與分泌亦下降;但在抑制HIF-1α的同時添加bFGF和VEGF可以緩解由于抑制HIF-1α造成的bASCs增殖減慢。(3)bASCs在低氧和常氧條件下均能表達多能性基因OCT4、SOX2、C-MYC、NANOG和KLF4,以及間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記抗原CD44、CD60、CD73、CD90和CD105,但不表達造血干細(xì)胞的表面抗原CD45。低氧顯著上調(diào)多能性相關(guān)基因OCT4、NANOG、C-MYC的表達(P0.05)。低氧顯著上調(diào)成脂、成骨、成軟骨標(biāo)志性基因PPAR-γ、RUNX2、COL2A1的表達(P0.05)。低氧培養(yǎng)的bASCs,其神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志基因TUBB3陽性率也顯著高于常氧培養(yǎng)的 bASCs(P0.05)。上述結(jié)果表明,bASCs可以通過I型膠原酶分離獲取,獲得的bASCs具有MSCs的生物學(xué)特性;5%低氧環(huán)境培養(yǎng)bASCs,可以通過低氧通路中HIF-1α與bFGF、VEGF相互作用促進bASCs增殖,降低細(xì)胞凋亡;5%低氧培養(yǎng)bASCs,更有利于其多能性的維持和多向分化潛能的提高。
【圖文】：

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【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S823.83

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 趙娜;;脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的現(xiàn)狀及前景[J];中國組織工程研究;2015年06期

2 蔣婷;楊澤龍;白倩;周廣東;劉偉;;不同代次小鼠脂肪干細(xì)胞增殖能力及體外成脂能力的實驗研究[J];組織工程與重建外科雜志;2013年04期

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本文編號：2530556