【摘要】：犢牛腹瀉是指犢牛在出生7h到12d內(nèi)所發(fā)生的一種急性腹瀉,一般由腸道內(nèi)細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)等傳染性因素或者營(yíng)養(yǎng)不良、飼養(yǎng)環(huán)境惡劣等非傳染性因素造成,嚴(yán)重時(shí)會(huì)引發(fā)脫水,造成犢牛大量死亡。犢牛腹瀉是全球奶牛、肉牛養(yǎng)殖過(guò)程中最常見(jiàn)的問(wèn)題,往往帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重制約著養(yǎng)牛行業(yè)的發(fā)展。在各種導(dǎo)致?tīng)倥８篂a的因素中,產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)是最主要的病原菌,也是牛發(fā)生腸毒血癥的病原菌之一。目前,多通過(guò)接種疫苗來(lái)預(yù)防此疾病的發(fā)生。然而,由于大腸桿菌血清型繁多,且不同區(qū)域流行情況不同,一些商品化疫苗往往不能得到很好的免疫效果,因此,新疫苗的研發(fā)一直是預(yù)防該病的重點(diǎn)。菌影是近年來(lái)的一種新型疫苗。它是通過(guò)基因滅活的方式將細(xì)菌變成一種無(wú)胞質(zhì)內(nèi)容物,但保留完整的細(xì)菌菌體及外膜上各種抗原結(jié)構(gòu)的無(wú)活性空胞體。由于菌影疫苗的免疫原性高,制備簡(jiǎn)單,保存運(yùn)輸方便,同時(shí)還具有免疫佐劑性質(zhì),能夠增強(qiáng)免疫應(yīng)答等諸多優(yōu)點(diǎn),使其成為國(guó)內(nèi)外研究人員的研究熱點(diǎn)。本研究以黑龍江部分牧場(chǎng)死亡腹瀉犢牛的病料為研究材料,從中分離出致病性大腸桿菌,并對(duì)其所攜帶的毒力因子進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)致病性大腸桿菌進(jìn)行分型。結(jié)果顯示,該地區(qū)致?tīng)倥８篂a的主要大腸桿菌病原型為產(chǎn)腸毒素大腸桿菌。在此基礎(chǔ)上,我們篩選出一株疫苗候選菌株,制備成產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗。通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)對(duì)產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗的免疫效果進(jìn)行檢測(cè)。將30只小鼠隨機(jī)分為三組,每組10只:菌影疫苗組、滅活疫苗組和對(duì)照組。疫苗的接種方式為腹腔注射,免疫劑量為1×108 CFU,每?jī)芍苊庖咭淮?共免疫三次。每次免疫一周后采取血清,利用間接ELISA方法檢測(cè)免疫小鼠血清抗體水平。疫苗三免一周后對(duì)免疫小鼠進(jìn)行腹腔攻毒,觀察并記錄攻毒一周內(nèi)小鼠的死亡情況。通過(guò)疫苗對(duì)小鼠的保護(hù)率以及小鼠抗體水平的檢測(cè)評(píng)價(jià)疫苗的免疫效果。結(jié)果表明,菌影疫苗對(duì)感染小鼠有較高的保護(hù)率,且能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的抗體水平。綜合本研究結(jié)果表明,產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌影疫苗具有良好的安全性,并具有很好的免疫原性,可激發(fā)動(dòng)物體產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答,可作為預(yù)防產(chǎn)腸毒素大腸桿菌導(dǎo)致的犢牛腹瀉的新型候選疫苗。本研究為產(chǎn)腸毒素大腸桿菌疫苗的制備提供了基礎(chǔ)。
【圖文】：

驗(yàn)結(jié)果腸桿菌的鑒定結(jié)果規(guī)鑒別培養(yǎng)基分離培養(yǎng)方法分離得到的 63 株疑似大腸桿菌進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增鑒定期大小相符的片段，約 947 bp（圖 3-1）。將 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物送至吉林庫(kù)美生物科序，，測(cè)序結(jié)果與 GenBank 上的序列進(jìn)行 BLAST 比對(duì)分析，同源性達(dá) 99%以上株為大腸桿菌。

DL2000 DNA Marker；1-6：K88 基因的 PCR 產(chǎn)物L(fēng)2000 DNA Marker; 1-6: PCR product of K88 gene圖 3-2 K88 基因的 PCR 鑒定結(jié)果Fig.3-2 Identification of K88 gene by PCRDL2000 DNA Marker；1-3：K99 基因的 PCR 產(chǎn)物L(fēng)2000 DNA Marker; 1-3: PCR product of K99 gene圖 3-3 K99 基因的 PCR 鑒定結(jié)果Fig.3-3 Identification of K99 gene by PCR
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S852.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2530392