發(fā)布時(shí)間：2019-08-12 18:38

【摘要】：為設(shè)計(jì)新型Metalnikowin類抗菌肽并評(píng)價(jià)其抗菌活性,依據(jù)抗菌肽Metalnikowin的作用機(jī)理和氨基酸組成,通過(guò)人工方法設(shè)計(jì)合成Metalnikowin類抗菌肽(Metalnikowin-like antibacterial peptide,MLP)并測(cè)定其體外和體內(nèi)抗菌活性。體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果顯示,抗菌肽MLP對(duì)雞致病性大腸桿菌O 1、豬致病性大腸桿菌K 99(A TCC39302)、雞白痢沙門菌(ATCC10398)、豬霍亂沙門菌(ATCC13312)、禽多殺性巴氏桿菌(CVCC474)和金黃色葡萄球菌(ATCC29213)均具有很好的抑菌活性,其對(duì)這6種細(xì)菌的最小抑菌濃度分別為1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5 g/m L。酸穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示,抗菌肽MLP在p H值為5~6時(shí)活性最高。熱穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示,抗菌肽MLP 100℃加熱40 min后仍具有抑菌活性。在對(duì)雛雞感染雞大腸桿菌和小鼠感染金黃色葡萄球菌的體內(nèi)療效試驗(yàn)中,抗菌肽MLP顯示了較好的治療效果。本研究為臨床上設(shè)計(jì)有效的Metalnikowin類抗菌肽提供了參考數(shù)據(jù)。
【圖文】：

多殺性巴氏桿菌P.multocida金黃色葡萄球菌S.aureusMetalnikowinⅠ15171713206MetalnikowinⅡ13018008MetalnikowinⅡB170150160抗菌肽MLP2119211825152.4抗菌肽MLP最小抑菌濃度的測(cè)定經(jīng)微量稀釋法檢測(cè)，，抗菌肽MLP對(duì)雞致病性大腸桿菌O1、豬致病性大腸桿菌K99（ATCC39302）、雞白痢沙門菌（ATCC10398）、豬霍亂沙門菌（ATCC13312）、禽多殺性巴氏桿菌（CVCC474）、金黃色葡萄球菌（ATCC29213）的最小抑菌濃度分別為1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5g/mL。2.5抗菌肽MLP的熱穩(wěn)定性檢測(cè)熱穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（見圖1）顯示，抗菌肽MLP在加熱煮沸后活性稍有下降，煮沸后第25分鐘活性下降較快，但第40分鐘仍然具有較高的抑菌活性，說(shuō)明其熱穩(wěn)定性較好。2.6抗菌肽MLP在不同pH值緩沖液中的穩(wěn)定性圖2結(jié)果顯示，抗菌肽MLP在pH5～6時(shí)最穩(wěn)定，酸堿對(duì)抗菌肽MLP的活性均有一定的影響。2.7抗菌肽MLP對(duì)致病性細(xì)菌的體內(nèi)抗菌活性接種雞致病性大腸桿菌原濃度和接種1∶10稀圖1抗菌肽MLP的熱穩(wěn)定性測(cè)定Fig.1Theheat-stabledeterminationofantibacterialpep-tideMLPbyboiling2520151050051015202530405060時(shí)間/minTime未煮沸的MLPUnboiledMLP煮沸的MLPBoiledMLP抑菌圈直徑/mmInhibitionzonediameter844

境中抗菌肽是否能保證穩(wěn)定不被胃酸降解消化。同時(shí)是否耐高溫，從而適合與各種飼料混合造粒等因素。因此，抗菌肽的理化特性的研究多集中在抑菌特性、熱穩(wěn)定性，抗酸堿穩(wěn)定性等臨床更具實(shí)際價(jià)值的理化特性方面。本研究對(duì)于抗菌肽MLP的理化特性進(jìn)行了分析，酸穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示，抗菌肽MLP在pH值為5～6時(shí)活性最高；熱穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示抗252015105023456789101112pH值pHvaluesMLPtreatedwithPBSMLPtreatedwithdifferentpH抑菌圈直徑/mmInhibitionzonediameter圖2抗菌肽MLP的酸堿穩(wěn)定性曲線Fig.2TheantibacterialactivityofantibacterialpeptideMLPaffectedbydifferentpH表4Metalnikowin類抗菌肽MLP對(duì)雞大腸桿菌病的治療效果（n＝20）Table4AntibacterialpeptideMLPtreatwithE.coliO1ofchicken組別Groups死亡率/％Mortalityrate保護(hù)率/％Protectionrate治愈率/％Curerate健康對(duì)照組Healthcontrolgroup0感染對(duì)照組Infectioncontrolgroup1001000環(huán)丙沙星組Ciprofloxacingroup455555MetalnikowinI組MetalnikowinIgroup653530MLP高劑量組MLPhighdosegroup505050MLP中劑量組MLPmiddledosegroup554545MLP低劑量組MLPlowdosegroup653535845
【作者單位】： 河南科技大學(xué)獸醫(yī)腫瘤免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物細(xì)菌學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【分類號(hào)】：S859.797

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本文編號(hào)：2525890