【摘要】：乳腺炎是奶牛場造成奶生產(chǎn)下降和巨大經(jīng)濟(jì)損失的一種復(fù)雜的奶牛疾病,嚴(yán)重地危害了奶牛業(yè)的健康發(fā)展,而金黃色葡萄球菌型乳腺炎足最嚴(yán)重的一種,治療成本大且難以治愈。目前仍未找到徹底解決的方法。本研究利用金黃色葡萄球菌構(gòu)建中國荷斯坦奶牛乳腺炎疾病模型,采用iTRAQ技術(shù)結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),篩選與奶牛金黃色葡萄球菌型乳腺炎密切相關(guān)的差異表達(dá)蛋白,并進(jìn)行相關(guān)的GO和Pathway等功能分析,從而得到與奶牛乳腺炎相關(guān)的新型生物標(biāo)記分子,以期初步從蛋白質(zhì)水平揭示奶牛乳腺炎的免疫調(diào)控機(jī)制。主要結(jié)果如下：1.本實(shí)驗(yàn)成功的建立了奶牛臨床型金黃色葡萄球菌型乳腺炎疾病模型,感染后奶牛所表現(xiàn)的臨床癥狀及各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(SCC, BMT等)結(jié)果,真實(shí)地反映了金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)奶牛乳腺炎的發(fā)病過程。2. iTRAQ技術(shù)分析共篩選到168個差異蛋白(Fold change≥1.5或者0.667,P0.05),其中66個在金葡菌組表達(dá)上調(diào),102個表達(dá)下調(diào)。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)有30個差異蛋白與乳腺組織的防御,免疫和炎癥反應(yīng)有關(guān)。3.差異蛋白的GO富集分析發(fā)現(xiàn),這些蛋白顯著富集到314條GO Term中(P0.05)。4.結(jié)合KEGG數(shù)據(jù)庫對差異表達(dá)蛋白進(jìn)行Pathway富集分析,篩選到20條與防御,免疫和炎癥相關(guān)的通路。主要有：FC小量RI信號通路、MAPK信號通路、NF-κB信號通路、B細(xì)胞受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、鈣信號通路、Toll樣受體信號通路、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用、血管內(nèi)皮生長因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移、造血細(xì)胞譜系、腸道免疫網(wǎng)絡(luò)的IgA生產(chǎn)、趨化因子信號通路、磷脂酰肌醇信號系統(tǒng)、細(xì)胞質(zhì)DNA的檢測途徑、FcγR-介導(dǎo)的吞噬作用、補(bǔ)體及凝血級聯(lián)反應(yīng)、T細(xì)胞受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、RIG-I樣受體信號通路、NOD樣受體信號通路、抗原加工和呈遞。進(jìn)一步對這些Pathway進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)圖分析,發(fā)現(xiàn)了12個樞紐蛋白：預(yù)測：血小板堿性蛋白、間α胰蛋白酶抑制物重鏈H3前體(IHIH3)、熱休克蛋白β-1(HSPB1)、熱休克70KDa蛋白1A(HSPA1A)、核因子NF-k-B P105亞基(NFKB1)、脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)、Ras相關(guān)C3肉毒素底2前體(RAC2)、預(yù)測：copine-3亞型X1、isochcrismatase結(jié)構(gòu)域蛋白1(ISOC1)、未鑒定的蛋白L oc524810前體(LOC524810)、整合素a-M前體(ITGAM)、整合素β-2前體(ITGB2)�？梢猿醪綄⑦@些關(guān)鍵蛋白作為乳腺炎抗性選擇的候選蛋白進(jìn)行深入的研究。
【圖文】：

金黃色葡萄球茵（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ邋ａｕｒｅｕｓ，金葡茜），是一種革蘭氏陽性球茵，厚壁菌口細(xì)逡逑菌的成員，廣泛分布于自然界，顯微鏡下排列成葡萄串狀，無芽抱、鞭毛，大多數(shù)無英膜，逡逑為需氧或兼性厭氧菌，為人畜共患型病菌（圖１－１）。該菌株經(jīng)常通過產(chǎn)生有效的蛋白毒素逡逑促進(jìn)感染，并產(chǎn)生細(xì)胞表面蛋白結(jié)合和滅活抗體。由于抗生素的大量使用甚至濫用，＾使逡逑金黃色葡萄球菌的抗生素耐藥性菌株出現(xiàn)，成為臨床醫(yī)學(xué)需要攻克的一個世界性的難題。逡逑圖１－１金黃色葡萄球稍逡逑Ｆｉｇ邋１－１邋Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ邋ａｕｒｅｕｓ逡逑２．２金黃色葡萄球菌型乳腺炎發(fā)病機(jī)理逡逑金黃色葡萄球菌是誘發(fā)乳腺炎的主要病原菌之一，它所誘發(fā)的乳腺炎達(dá)到３０％邋Ｗ上，逡逑可產(chǎn)生破壞細(xì)胞膜和直接損傷產(chǎn)奶組織的毒素。最初，細(xì)菌破壞乳頭管壁和乳腺池，導(dǎo)致逡逑形成瘡痕組織。隨后細(xì)菌再向上移動進(jìn)入管道系統(tǒng)，，在泌乳細(xì)胞（腺泡）形成深層次感染。逡逑

圖１－２邋ｉＴＲＡＱ試劑標(biāo)簽結(jié)構(gòu)圖（引自歐易生物醫(yī)學(xué)）逡逑Ｆｉｇ邋１－邋２邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｉＴＲＡＱ邋ｒｅａｇｅｎｔ逡逑�。遥粒鸭夹g(shù)的主要操作流程如下（圖１－３）包括：樣品蛋白質(zhì)的提`e蛋白質(zhì)樣品的酶逡逑解，酶解片段進(jìn)行標(biāo)記后混合，多維色譜分離，液相串聯(lián)質(zhì)譜鑒定，從而分離和鑒定不同逡逑來源樣品的蛋白。逡逑？回＆＊？邐ｎｉｆｔＵ邐＾邐＇ｒ－邋＇Ｓ＇逡逑矮換泉?dú)猓叮迹颍氐篃湥疬姡慑澹颍徨义希担铮迹颍澹澹停常�？－邐，，．邋ｌｉｉ．邐，■邐逡逑、５邐％邐＼？ＵＭ邋ｔ？＊＊ｊ邐＊？、《邐Ｃ》１Ｕ邐１２１．逡�?邐，．邐＿＿邋二邐＾？＾－－＾＂＊＊＊＂＊＊＊＊＊＊＇＾＊＊＂＾邐Ｉ邋Ｉ邋ｌａＪ叫ｕｌ—逡逑~T一‘？邐呵＊＇於＇？邐、．邋Ａ—－－－＇．－■＊邋邋邋＇．…＊逡逑圖１－３�。遥粒言砗土鞒虉D（引自舜百生物）逡逑Ｒｇ邋１邋－３邋Ｔｈｅ邋ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ邋ａｎｄ邋ｗｏｒｋｆｌｏｗ邋ｏｆ邋ｉＴＲＡＱ逡逑近年來，ＩＴＲＡＱ技術(shù)已成為研究蛋白質(zhì)組學(xué)定性和定量研究的主要工具么一，其作逡逑巧已經(jīng)在許多生物體和組織研究中得到證明ＷＷＷ，其優(yōu)越性也在逐步地凸顯，主要體現(xiàn)逡逑在Ｗ下幾個方面：（１）定量精度高、標(biāo)記完全。ｉＴＲＡＱ技術(shù)通過對標(biāo)記蛋白進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)逡逑譜的峰值的比較來定量，與傳統(tǒng)的雙向電泳相比，其結(jié)果相對客觀且精確性好。另外，由逡逑于試劑可Ｗ標(biāo)記任何化段
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.23

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本文編號：2522185