【摘要】：以原代培養(yǎng)的豬卵巢顆粒細(xì)胞為模型,設(shè)立玉米赤霉烯酮(ZEA)對(duì)照組(0.0 mg/L)及高(80.0 mg/L)、中(20.0,40.0mg/L)、低(0.2,2.0mg/L)劑量組,比較不同質(zhì)量濃度ZEA對(duì)體外培養(yǎng)豬卵巢顆粒細(xì)胞的影響。形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),隨著ZEA質(zhì)量濃度的增加,顆粒細(xì)胞呈散在生長(zhǎng),體積縮小變圓,數(shù)量減少;高劑量組(80.0mg/L)中,76.96%細(xì)胞均已脫壁死亡。MTT法表明,ZEA對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞具有生長(zhǎng)抑制作用;免疫熒光結(jié)果顯示隨ZEA質(zhì)量濃度的增加,細(xì)胞凋亡率逐漸升高,高質(zhì)量濃度組細(xì)胞增殖率僅為1.01%;Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示經(jīng)ZEA處理,Fas、FasL、FADD、Caspase-10的表達(dá)量均明顯上調(diào),且存在質(zhì)量濃度-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果表明,ZEA能誘導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡,并顯著上調(diào)Fas、FasL、FADD、Caspase-10的表達(dá),可通過死亡受體通路介導(dǎo)卵巢顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡。
【圖文】：

積寬大、排列緊密、細(xì)胞透亮、胞漿飽滿（圖１Ａ）。而在ＺＥＡ處理組，隨著ＺＥＡ質(zhì)量濃度的增加，顆粒細(xì)胞呈散在生長(zhǎng)、細(xì)胞突起變短減少、胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)較多顆粒和空泡。貼壁細(xì)胞的數(shù)量逐漸減少，細(xì)胞體積明顯縮小呈圓形，且高劑量Ｆ組（８０．０ｍｇ／Ｌ）絕大多數(shù)細(xì)胞都已脫壁死亡（圖１Ｆ）。圖１不同質(zhì)量濃度ＺＥＡ處理豬卵巢顆粒細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化（２００×）Ａ．０．０ｍｇ／Ｌ；Ｂ．０．２ｍｇ／Ｌ；Ｃ．２．０ｍｇ／Ｌ；Ｄ．２０．０ｍｇ／Ｌ；Ｅ．４０．０ｍｇ／Ｌ；Ｆ．８０．０ｍｇ／Ｌ２．２ＺＥＡ對(duì)豬卵巢顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用ＺＥＡ對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞有較強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制作用。處理組之間相互比較，隨著ＺＥＡ質(zhì)量濃度的增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)，且細(xì)胞抑制率與ＺＥＡ質(zhì)量濃度呈正相關(guān)（Ｒ２＝０．９９８４）。當(dāng)質(zhì)量濃度為４０．０ｍｇ／Ｌ時(shí)，抑制率為４６．８８％，接近半數(shù)抑制濃度（ＩＣ５０）；而當(dāng)質(zhì)量濃度為８０．０ｍｇ／Ｌ，抑制率為７６．９６％，大部分細(xì)胞死亡；表明ＺＥＡ對(duì)顆粒細(xì)胞具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性。Ｅｘｃｅｌ數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，質(zhì)量濃度與抑制率呈二階多項(xiàng)式：ｙ＝３．８１５５ｘ２－１１．５１１ｘ＋８．６１３０，擬合優(yōu)度Ｒ２＝０．９９８４，經(jīng)ｆ檢驗(yàn)Ｐ＝４．９２Ｅ－０６，水平上顯著（表１、圖２）。表１不同質(zhì)量濃度ＺＥＡ對(duì)豬卵巢顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用處理組ＺＥＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）Ｄ５７０值細(xì)胞抑制率／％Ａ０．００．６４±０．０４０．００Ｂ０．２０．６１±０．０４３．０１±１．０６Ｃ２．００

９８４，經(jīng)ｆ檢驗(yàn)Ｐ＝４．９２Ｅ－０６，水平上顯著（表１、圖２）。表１不同質(zhì)量濃度ＺＥＡ對(duì)豬卵巢顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用處理組ＺＥＡ／（ｍｇ·Ｌ－１）Ｄ５７０值細(xì)胞抑制率／％Ａ０．００．６４±０．０４０．００Ｂ０．２０．６１±０．０４３．０１±１．０６Ｃ２．００．５８±０．０３７．４０±１．２０Ｄ２０．００．４８±０．０３２２．９１±１．３０Ｅ４０．００．３３±０．０４４６．８８±３．３４Ｆ８０．００．１４±０．０１７６．９６±２．５２圖２不同質(zhì)量濃度ＺＥＡ作用于豬卵巢顆粒細(xì)胞的抑制率３．３ＺＥＡ對(duì)豬卵巢顆粒細(xì)胞增殖的影響在熒光顯微鏡下，Ｂｒｄｕ陽性染色呈綠色，Ｈｏｃｈｅｓｔ３３３４２染色呈藍(lán)色。各組隨機(jī)選�。祩�(gè)視野，進(jìn)行拍照，，統(tǒng)計(jì)分析（圖３）。結(jié)果顯示，未處理過的細(xì)胞增殖率為１６．４９％。隨著ＺＥＡ質(zhì)量濃度的增加，增殖率逐漸下降；Ｂ組（０．２ｍｇ／Ｌ）增殖率下降沒有明顯的差異（表２）；Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ組陽性細(xì)胞比例明顯減少，增殖率均有不同程度的下降。質(zhì)量濃度與抑制率符合四階方程：ｙ＝０．００９２ｘ４＋０．０３８９ｘ３－１．４１５０ｘ２＋２．７４９６ｘ＋１５．１４０，Ｒ２＝０．９９８４，觀測(cè)值與方程擬合度高（圖４）。２９９中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)２０１７年２月第３７卷第２期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＦｅｂ．２０１７Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．２
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;楊凌聯(lián)合營(yíng)養(yǎng)生物科技有限公司;
【基金】：陜西省科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新資金資助項(xiàng)目(2014CXZJ49) 陜西楊凌示范區(qū)科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(2014NY-38)
【分類號(hào)】：S859.87

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本文編號(hào)：2521441