發(fā)布時間：2019-04-25 15:50

【摘要】：內(nèi)脂素(Visfatin)是一種脂肪細胞因子。研究發(fā)現(xiàn),Visfatin與糖尿病、肥胖、炎癥以及代謝綜合征有著緊密的聯(lián)系,其與炎癥反應(yīng)的相關(guān)研究已成為一個新的熱點,而p38信號通路作為MAPK通路里的一個亞型,是炎癥反應(yīng)中的一個重要參與者。本研究用LPS刺激構(gòu)建免疫應(yīng)激引起的炎癥模型,通過觀察Visfatin對細胞活性和相關(guān)炎癥因子的影響,Visfatin和p38信號通路之間的關(guān)系,以明確Visfatin在參與炎癥反應(yīng)時的作用及途徑,為探尋Visfatin在治療炎癥疾病方面提供新的思路。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1 Visfatin和LPS對RAW264.7細胞形態(tài)和活力的影響MTT試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著Visfatin和LPS濃度的改變,RAW264.7細胞形態(tài)、數(shù)量和活力均發(fā)生變化。當Visfatin濃度達到200 ng/m L,細胞數(shù)量明顯增加,以圓形細胞為主,細胞聚集生長,而且細胞活力達到峰值(P0.01);Visfatin濃度超過200 ng/m L時,細胞數(shù)量明顯減少,許多細胞體積變大,細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡,細胞活力開始下降。當LPS的濃度達到10 ug/m L時,細胞偽足增多,許多細胞體積變大,細胞出現(xiàn)空泡,部分細胞破裂,細胞的活力最強(P0.05);繼續(xù)加大LPS的劑量,細胞中空泡更為明顯,破裂的細胞也顯著增多,細胞的活力顯著下降;在50 ug/m L時細胞活力已經(jīng)小于對照組的細胞活力,說明高劑量的Visfatin和LPS對RAW264.7細胞有一定的毒性作用。2不同組RAW264.7細胞內(nèi)IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表達ELISA結(jié)果顯示,與對照組相比,Visfatin的加入可以顯著上調(diào)IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α(P0.05)的表達;在LPS組中,IL-1β、IL-10、TNF-α的表達與比對照組相比有明顯增加(P0.05);而與LPS組相比,在Visfatin+LPS組中IL-1β、IL-10、TNF-α的表達顯著下降(P0.05)。3不同組大鼠肝臟中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表達體內(nèi)試驗結(jié)果顯示,和生理組相比,Visfatin和LPS組中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表達均顯著升高(P0.01);與LPS組相比,Visfatin+LPS組中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α卻顯著下降(P0.01);其中肝臟中IL-1β、IL-10、TNF-α的表達規(guī)律和細胞試驗中的結(jié)果一致。4不同處理組大鼠肝臟內(nèi)髓過氧化物酶的表達免疫組化結(jié)果顯示,MPO陽性產(chǎn)物呈棕褐色,細胞質(zhì)和細胞核中均有分布。肝臟中分布廣泛,主要位于肝臟門管區(qū)附近。數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果表明,與生理鹽水組相比,visfatin組的MPO顯著減少(P0.05),而LPS組肝臟中MPO略為減少,差異不顯著(P0.05),而和LPS組相比,在visfatin+LPS組肝臟中的MPO卻顯著減少(P0.05)。結(jié)果表明visfatin可以減少肝臟中MPO的表達,而在LPS刺激后,visfatin更是減少了MPO的表達。5 Visfatin對p38信號通路的影響添加p38的抑制劑SB203580之后,與單獨加入Visfatin相比,IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α均發(fā)生了顯著下調(diào)(P0.01),結(jié)果表明Visfatin是通過p38信號通路來調(diào)節(jié)IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表達的。Western Blot試驗結(jié)果顯示,與PBS組相比,Vifatin組中p38的表達水平顯著升高(P0.05);與LPS組相比,Visfatin+LPS組的p38水平顯著升高(P0.05)。而在觀察P-p38的表達時發(fā)現(xiàn),與PBS組相比,Visfatin組中的P-p38的表達顯著下降(P0.05);與LPS組相比,Visfatin+LPS組的P-p38水平顯著下降(P0.05)。結(jié)果表明Visfatin可能是通過上調(diào)p38和下調(diào)P-p38的表達來調(diào)節(jié)機體的炎癥反應(yīng)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.3

【參考文獻】

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1 柴麗娟;王安紅;徐金虎;王虹;王少峽;張晗;張曉霞;;補骨脂4種組分對LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細胞炎癥因子的影響[J];中藥新藥與臨床藥理;2013年04期

2 萬強;崔小冰;賈鈺華;周鳳華;趙曉山;孫學(xué)剛;楊靜華;;黃連素通過ERK1/2通路降低內(nèi)臟脂肪素誘導(dǎo)HUVEC分泌TNF-α和IL-6的研究[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2014年14期

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本文編號：2465260