【摘要】：腸道上皮屏障是機(jī)體最大的黏膜屏障,某些腸道上皮細(xì)胞產(chǎn)生的胰島再生源蛋白Ⅲγ(regener-ating islet-derived protein Ⅲγ,RegⅢγ)在腸道固有免疫中起到重要作用。過去的研究發(fā)現(xiàn)白介素23、22(IL-23/IL-22)等細(xì)胞因子及髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)能夠促進(jìn)RegⅢγ的表達(dá)。正常條件下的腸道RegⅢγ有效降低炎癥進(jìn)程,促進(jìn)組織損傷的修復(fù),在抵御和降低炎癥性腸病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)的發(fā)病及發(fā)展中發(fā)揮重要作用。乳酸菌作為腸道內(nèi)共生的優(yōu)勢菌群,可通過對腸道上皮的相互作用,刺激腸上皮細(xì)胞活化,促進(jìn)樹突狀細(xì)胞成熟,進(jìn)而引起腸道防御屏障的激活,達(dá)到增強(qiáng)腸道免疫防御功能,維持機(jī)體健康的作用。然而乳酸菌是如何作用腸道上皮產(chǎn)生RegⅢγ的機(jī)理尚不明確,且其對IBD炎癥過程的作用及機(jī)理仍不清晰。本研究通過檢測分析乳酸菌對小鼠干預(yù)后,體內(nèi)RegⅢγ表達(dá)量的變化,以及乳酸菌對IBD炎癥過程機(jī)體中各炎性因子變化量的影響。探討乳酸菌介導(dǎo)RegⅢγ表達(dá)的作用機(jī)理,及其在腸炎黏膜免疫中的免疫防御功能及拮抗作用的分子機(jī)制。研究內(nèi)容如下:(1)不同劑量混合乳酸菌對健康小鼠腸道RegⅢγ表達(dá)量的影響本試驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上,選取有較強(qiáng)益生作用的混合乳酸菌,分高、低劑量對健康小鼠進(jìn)行干預(yù),通過熒光定量PCR、流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及免疫組化技術(shù),檢測干預(yù)小鼠腸道中RegⅢγ及誘導(dǎo)其產(chǎn)生的活化樹突狀細(xì)胞、MyD88、IL-23、IL-22細(xì)胞因子表達(dá)量的變化,探索不同劑量乳酸菌在健康小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)RegⅢγ分泌的分子機(jī)制,并對比篩選出乳酸菌免疫的最佳劑量。結(jié)果表明:混合乳酸菌在健康小鼠腸道定植后RegⅢγ的表達(dá)量顯著增高,與對照組比較差異顯著(P0.05),其混合乳酸菌干預(yù)后小鼠體內(nèi)活化樹突狀細(xì)胞數(shù)量明顯增高,與對照組比較差異顯著(P0.01)。伴隨活化樹突狀細(xì)胞數(shù)量的增加,小鼠腸道內(nèi)IL-23、IL-22及MyD88的表達(dá)量也顯著高于對照組(P0.01)。試驗(yàn)同時(shí)證明,不同劑量的乳酸菌中,高劑量乳酸菌對腸道的免疫作用更強(qiáng)。(2)混合乳酸菌誘導(dǎo)的RegⅢγ在潰瘍性結(jié)腸炎黏膜免疫中的作用研究IBD是一種慢性的炎癥性腸病,其成因復(fù)雜且治療難度大。而乳酸菌作為腸道益生菌已經(jīng)被證明能夠增強(qiáng)機(jī)體腸道免疫能力�？咕鞍識(shí)egⅢγ作為腸道先天免疫中重要的免疫因子,對腸道的保護(hù)功能越來越受到人們的關(guān)注。因此本研究在前期工作的基礎(chǔ)上,選用篩選出的具有良好益生活性的高劑量混合乳酸菌對健康小鼠進(jìn)行干預(yù),通過IFA、組織切片HE染色、ELISA等實(shí)驗(yàn)技術(shù),檢測腸道中RegⅢγ、MPO及血清中SAA的表達(dá)變化,同時(shí)監(jiān)測腸道病理變化,以探討口服高劑量混合乳酸菌后的小鼠對DSS造成的潰瘍性腸炎的黏膜免疫作用。結(jié)果顯示:在腸炎模型中RegⅢγ表達(dá)量顯著升高(P0.005),但乳酸菌組RegⅢγ的量顯著下調(diào)(P0.01)。研究進(jìn)一步證實(shí),在對腸道病理檢測、腸道炎性因子MPO及全身炎癥反應(yīng)物SAA的檢測中,乳酸菌組的檢測結(jié)果均顯著低于DSS組(P0.01),(P0.05)。以上共同說明,通過前期乳酸菌的預(yù)防干預(yù),能夠提高機(jī)體對DSS造成的腸炎的抵抗作用,這可能與乳酸菌前期干預(yù)產(chǎn)生的RegⅢγ有關(guān)。綜上所述,混合乳酸菌能夠在一定程度上活化樹突狀細(xì)胞,進(jìn)而上調(diào)IL-23、IL-22及MyD88的表達(dá)量,增加RegⅢγ的分泌。在這一過程中,高劑量混合乳酸菌顯示出更高效的介導(dǎo)作用。進(jìn)一步研究表明,在DSS引起的腸炎過程中,高劑量混合乳酸菌介導(dǎo)RegⅢγ免疫反應(yīng)能夠起到抑制炎癥因子,降低炎癥反應(yīng)的作用。
[Abstract]:The intestinal epithelial barrier is the largest mucosal barrier in the body. Previous studies have found that cytokines such as interleukin 23,22 (IL-23/ IL-22) and myeloid differentiation factor 88 (MyD88) can promote the expression of Reg 鈪，

本文編號(hào)：2453585