【摘要】：為研究豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)ORF3蛋白的免疫活性,對其進行了表達及初步鑒定。根據(jù)NCBI上PCV-2ORF3的基因序列(FR823451)設計特異性引物,擴增后將其插入pET28a表達載體構建了重組表達質粒pET-PCV-2-ORF3,轉化E.coli BL21(DE3)誘導表達后用SDS-PAGE和免疫印跡進行了鑒定。隨后又用圓環(huán)病毒野毒感染豬和重組ORF2免疫小鼠的陽性血清對表達蛋白的免疫原性進行了檢測。結果表明,構建成功的pET-PCV-2-ORF3表達菌被誘導后能大量表達PCV-2 ORF3蛋白。ORF3表達蛋白能與圓環(huán)病毒野毒感染豬的陽性血清發(fā)生特異性反應,與重組疫苗免疫鼠的陽性血清不能發(fā)生反應,表明ORF3蛋白具有很好的免疫原性和反應原性,有望作為圓環(huán)病毒野毒感染檢測的靶抗原。
[Abstract]:In order to study the immune activity of porcine circovirus type 2 (PCV-2) ORF3 protein, its expression and preliminary identification were carried out. According to the gene sequence (FR823451) of PCV-2ORF3 on NCBI, specific primers were designed and inserted into pET28a expression vector to construct the recombinant expression plasmid pET-PCV-2-ORF3,. The expression of transformed E.coli BL21 (DE3) was identified by SDS-PAGE and Western blot. The immunogenicity of the expressed protein was detected by the positive serum of recombinant ORF2 immunized mice and pigs infected with circovirus wild virus. The results showed that the successfully constructed pET-PCV-2-ORF3-expressing strain could express a large amount of PCV-2 ORF3 protein after induction, and the ORF3 expression protein could react specifically with the positive sera of pigs infected with circovirus wild virus. The positive sera of mice immunized with recombinant vaccine could not react, which indicated that ORF3 protein had good immunogenicity and reactivity, and could be used as a target antigen for detection of field virus infection of circovirus.
【作者單位】： 沈陽農業(yè)大學畜牧獸醫(yī)學院;
【基金】：沈陽農業(yè)大學2015年大學生創(chuàng)新訓練項目
【分類號】：S852.651

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