【摘要】：雞的卵巢卵泡生長發(fā)育過程中,下丘腦-垂體-性腺軸(hypothalamic-pituitary-gonadal axis,HPGA)起到了非常重要的作用。下丘腦-垂體-性腺軸是一個(gè)完整而協(xié)調(diào)的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng),下丘腦通過分泌GnRH調(diào)節(jié)垂體LH和FSH的釋放,從而控制性腺發(fā)育和性激素的分泌。本研究對GnRH1在雞下丘腦和卵巢卵泡發(fā)育過程中的表達(dá)及其調(diào)控作用進(jìn)行了初步分析。結(jié)果如下:1.qRT-PCR分析GnRH1基因在30、60、90、110和140日齡產(chǎn)蛋(140a)和未產(chǎn)蛋(140b)濟(jì)寧百日雞下丘腦和卵巢中的表達(dá)。結(jié)果顯示:GnRH1 mRNA在下丘腦和卵巢中的表達(dá)從30日齡至140日齡未開產(chǎn)雞均呈現(xiàn)出低高低高的趨勢,60日齡與140日齡的表達(dá)量顯著高于其他各個(gè)時(shí)期(P0.05),但兩者之間差異不顯著(P0.05);而在卵巢中,140日齡時(shí)GnRH1 mRNA相對表達(dá)量同下丘腦一樣顯著上調(diào),但產(chǎn)蛋時(shí)卻顯著下調(diào)(P0.05),表現(xiàn)出與下丘腦不同的變化趨勢。在開產(chǎn)后雞的不同等級(jí)卵泡中,GnRH1 mRNA表達(dá)從SW(the small white follicle)到F5(the fifth large follicle)最后到F1(the first large follicle)和POF1(the first post-ovulatory follicle)中的表達(dá)差異未達(dá)到顯著(P0.05)。2.免疫組化檢測結(jié)果顯示,GnRH1免疫陽性信號(hào)在未開產(chǎn)雞(45d)和開產(chǎn)雞(159d)卵巢膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞均被檢測到,并且在未性成熟雞的卵巢中,其主要在卵泡顆粒細(xì)胞層表達(dá)較高,而性成熟后則在膜細(xì)胞層表達(dá)較高。進(jìn)一步分離性成熟卵巢卵泡的顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞,qRT-PCR結(jié)果表明,GnRH1 mRNA在卵泡膜細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于顆粒細(xì)胞(P0.05),與免疫組化結(jié)果一致。3.構(gòu)建GnRH1基因的過表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染雞原代膜細(xì)胞和顆粒細(xì)胞后,檢測LHR,FSHR,PGR,ERα基因的表達(dá)量。結(jié)果顯示,過表達(dá)GnRH1后,在顆粒細(xì)胞中,四個(gè)受體基因表達(dá)量均未出現(xiàn)顯著變化;在膜細(xì)胞中,FSHR,PGR,ERαmRNA表達(dá)量未發(fā)生顯著變化,而LHR m RNA表達(dá)量出現(xiàn)了顯著下調(diào)(P0.01)。隨后用LH和FSH激素處理膜細(xì)胞,檢測GnRH1 mRNA的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,FSH激素對GnRH1的表達(dá)無顯著影響,LH在濃度50 ng/mL時(shí),GnRH1表達(dá)量顯著上調(diào)(P0.05);繼續(xù)加大LH的濃度發(fā)現(xiàn),當(dāng)LH濃度大于200 ng/mL時(shí),GnRH1 mRNA表達(dá)量開始下調(diào),而LHR mRNA表達(dá)量與LH濃度呈正相關(guān)。隨后用50 ng/mL LH激素與GnRH1過表達(dá)共處理后,LHR表達(dá)量出現(xiàn)顯著下調(diào)(P0.01)。4.在雞等級(jí)卵泡膜細(xì)胞中過表達(dá)GnRH1基因并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,以未過表達(dá)GnRH1基因的膜細(xì)胞為對照,在過表達(dá)GnRH1的等級(jí)卵泡膜細(xì)胞中共篩選出了3997個(gè)差異表達(dá)基因,其中上調(diào)的差異表達(dá)基因1998個(gè),下調(diào)的差異表達(dá)基因1999個(gè),并對部分差異表達(dá)基因進(jìn)行了qRT-PCR驗(yàn)證,包括表達(dá)量下調(diào)的基因CYP11A1,MMP11,MMP13,StAR,上調(diào)的基因FOXP1,FOXP2,VEGFA,USF1。對差異基因進(jìn)行功能注釋發(fā)現(xiàn),它們被富集到FOXO、MAPK、TGF-beta、VEGF、GnRH、PPAR、Prosgesterone-mediated oocyte maturation、Toll-like receptor以及Wnt等信號(hào)通路。5.分析了GnRH1基因5′調(diào)控區(qū)長度3863bp片段的啟動(dòng)活性,雙熒光素酶活性分析結(jié)果表明,在GnRH1基因啟動(dòng)子區(qū)3863bp長度內(nèi)各個(gè)區(qū)域均未發(fā)現(xiàn)雙熒光素活性,具體原因需進(jìn)一步試驗(yàn)分析�？傊�,我們目前的研究結(jié)果表明:GnRH1作為卵巢內(nèi)調(diào)節(jié)因子,接近開產(chǎn)時(shí)GnRH1mRNA的高表達(dá)有助于雞性成熟的啟動(dòng)。在雞卵巢膜細(xì)胞中,GnRH1可介導(dǎo)LH與LHR受體的結(jié)合,從而影響卵巢卵泡的發(fā)育和排卵。GnRH1可與多種因子協(xié)同調(diào)控雞卵巢功能,在雞性成熟的啟動(dòng)和卵巢卵泡發(fā)育中起著重要作用,具體調(diào)控機(jī)制有待深入研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S831

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 湯錦如;;大腸桿菌引起成年母雞卵巢卵泡囊腫的診斷[J];中國畜禽傳染病;1988年03期

2 楊賢欽;牛直腸觸摸法檢查卵巢卵泡的發(fā)育及判定標(biāo)準(zhǔn)[J];廣西畜牧獸醫(yī);2003年03期

3 李鵬飛;岳文斌;李富祿;黃洋;孫晉艷;朱芷薇;于秀菊;賀俊平;范瑞文;任有蛇;呂麗華;;可卡因-苯丙胺調(diào)控轉(zhuǎn)錄肽(CART)對豬卵巢卵泡顆粒細(xì)胞雌激素產(chǎn)生的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年12期

4 王海濱,夏國良,李美玲,郭勇,謝輝蓉;表皮生長因子對卵泡刺激素促進(jìn)的小鼠胚胎卵巢卵泡發(fā)育和雌二醇分泌的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2001年01期

5 金花子;金一;;豬卵巢細(xì)胞中凋亡抑制因子cFLIP在卵巢卵泡和黃體中的表達(dá)[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年07期

6 王海濱,李美鈴,夏國良,呂忠顯,郭勇,張建超;促性腺激素對小鼠胚胎卵巢卵泡體外發(fā)育和類固醇激素分泌的作用[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2001年06期

7 王海濱,李美玲,夏國良,呂忠顯,郭勇,謝輝蓉;表皮生長因子對胎鼠卵巢卵泡體外發(fā)育和類固醇激素分泌的影響[J];中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年01期

8 劉林;禽類卵泡生殖內(nèi)分泌機(jī)能及其調(diào)控[J];動(dòng)物學(xué)雜志;1990年04期

9 李鵬飛;岳文斌;黃洋;孫晉艷;李曉明;龐鈺瑩;于學(xué)靜;賀俊平;孟金柱;任有蛇;呂麗華;;可卡因-苯丙胺調(diào)控轉(zhuǎn)錄肽對綿羊卵巢卵泡顆粒細(xì)胞雌激素產(chǎn)生的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2013年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 丁威;惠鋒明;周波;方天;陳軍;邢軍;石放雄;;二花臉豬卵巢卵泡形成與早期發(fā)育[A];中國地方豬種保護(hù)與利用第十屆年會(huì)論文集[C];2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 林婷婷;GDF8及其相關(guān)受體在人正常及PCOS卵巢卵泡中的表達(dá)[D];浙江大學(xué);2017年

，

本文編號(hào)：2444669