【摘要】：為建立一種快速、準(zhǔn)確的動物肉品中旋毛蟲檢測方法,根據(jù)旋毛蟲ITS-Ⅱ基因序列,設(shè)計環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(loop-m ediated isothermal amplification,LAMP)引物,進(jìn)行LAMP擴(kuò)增。將旋毛蟲DNA進(jìn)行梯度稀釋,以其為模板分別進(jìn)行LAMP和常規(guī)PCR擴(kuò)增,分析LAMP檢測技術(shù)的敏感性。分別以旋毛蟲、弓形蟲、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲、柔嫩艾美耳球蟲、豬囊尾蚴、大腸桿菌等病原的基因組DNA為模板,進(jìn)行LAMP檢測,分析該檢測方法的特異性。用該LAMP檢測方法,分別對模擬樣品和市售豬舌、鴨舌、雞舌、羊舌和牛舌等110份樣品進(jìn)行旋毛蟲感染情況檢測。LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果和可視化SYBR G reen I熒光染料顏色的變化均表明該LAMP檢測方法建立成功。當(dāng)模板DNA稀釋到10~(12)時亦可以檢測,其敏感性是常規(guī)PCR的1 000倍。特異性研究發(fā)現(xiàn),只有以旋毛蟲基因組DNA為模板所進(jìn)行的LAMP檢測才出現(xiàn)階梯形的電泳條帶并且其SYBR Green I熒光染料呈現(xiàn)綠色熒光。在2 g肌肉中添加1條旋毛蟲肌幼蟲時亦能被該LAMP方法檢測出來。但110份舌肌樣品中均未檢測到旋毛蟲,LAMP檢測結(jié)果與常規(guī)PCR結(jié)果一致。結(jié)果表明,本研究建立了基于旋毛蟲ITS-Ⅱ基因的LAMP檢測技術(shù),該技術(shù)具有較好的敏感性和特異性,在樣品檢測中具有簡便快捷的優(yōu)點。
[Abstract]:In order to establish a rapid and accurate method for detection of Trichinella spiralis in animal meat, according to the sequence of ITS- 鈪，

本文編號：2437172