【摘要】：為探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白對細胞自噬的影響,本研究構建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重組質粒,并采用脂質體將這兩種重組表達質粒共轉染293T細胞或Hela細胞中,同時以單獨轉染這兩種重組質粒的細胞作為對照組,利用間接免疫熒光和westernblot的方法檢測細胞自噬體及自噬流情況。自噬體檢測結果表明,AIVM2蛋白能夠誘導轉染細胞內(nèi)自噬體積累。通過LC3-IIturnover試驗、mRFP-GFP-LC3雙熒光指示系統(tǒng)以及pEGFP-LC3與LAMP1的共定位檢測進一步證明,M2蛋白通過阻斷自噬體與溶酶體融合,抑制溶酶體對自噬體的降解從而誘導自噬體積累。本研究揭示AIVM2蛋白對細胞自噬的發(fā)生具有重要作用,為深入研究自噬在A型流感病毒復制中的調(diào)節(jié)作用奠定基礎。
[Abstract]:In order to investigate the effect of avian influenza virus (AIV) M2 protein on autophagy, recombinant plasmids of pEGFP-LC3 and pCAF-M2 were constructed and co-transfected into 293T cells or Hela cells by lipofectamine. At the same time, the autophagy and autophagy were detected by indirect immunofluorescence and westernblot in cells transfected with these two recombinant plasmids as control group. Autophagy assay showed that AIVM2 protein could induce the accumulation of autophagy in transfected cells. LC3-IIturnover test, mRFP-GFP-LC3 double fluorescence indicator system and co-localization of pEGFP-LC3 and LAMP1 further demonstrated that M2 protein could block the fusion of autophagy and lysosome. Inhibition of lysosome degradation of autophagy and induction of autophagy accumulation. This study reveals that AIVM2 protein plays an important role in the occurrence of autophagy and lays a foundation for further study on the regulation of autophagy in the replication of influenza A virus.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部動物流感重點實驗室/獸醫(yī)生物技術國家重點實驗室;
【基金】：國際合作項目(2014DFR31260) 國家重點研發(fā)計劃(2016YFD0500800)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2435079