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禽流感病毒與雞細(xì)小病毒二重PCR檢測(cè)方法的建立

發(fā)布時(shí)間:2019-03-03 20:42
【摘要】:為建立一種能同時(shí)鑒別診斷禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和雞細(xì)小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的檢測(cè)方法,本研究根據(jù)GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分別設(shè)計(jì)并篩選出兩對(duì)特異性引物,用于AIV和ChPV的檢測(cè)。通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了AIV和ChPV二重PCR檢測(cè)方法。試驗(yàn)結(jié)果表明,該方法特異好,能同時(shí)檢測(cè)AIV和ChPV,對(duì)其他常見(jiàn)的禽病病原體均未反應(yīng);該法對(duì)AIV和ChPV的檢測(cè)下限均為100fg;對(duì)159份臨床樣品檢測(cè)結(jié)果與PCR陽(yáng)性產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果一致。本研究建立的AIV和ChPV二重PCR檢測(cè)方法具有特異性好、靈敏度高的特點(diǎn),對(duì)AIV和ChPV的防制具有重要意義。
[Abstract]:In order to establish a method for simultaneous differential diagnosis of avian influenza virus (avian influenza virus,AIV) and chicken parvovirus (chicken parvovirus,ChPV), the M gene of AIV in GenBank and the conserved sequence of NS gene of ChPV were used in this study. Two pairs of specific primers were designed and screened for the detection of AIV and ChPV. The detection methods of AIV and ChPV double PCR were established by optimizing the reaction conditions. The results showed that the method was specific and could not react to other common pathogens of avian diseases at the same time, and the detection limit of AIV and ChPV was 100 fg, and the detection limits of AIV and ChPV, were 100 fg and 100 fg, respectively. The sequencing results of 159 clinical samples were consistent with those of PCR positive products. The double PCR method established in this study has the characteristics of good specificity and high sensitivity. It is of great significance for the prevention and control of AIV and ChPV.
【作者單位】: 廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】:廣西科技基地和人才專(zhuān)項(xiàng)項(xiàng)目(桂科AD16380009) 桂漁牧科(201204930、201452001) 國(guó)家“萬(wàn)人計(jì)劃”領(lǐng)軍人才專(zhuān)項(xiàng)(2016-37-88) 廣西科技項(xiàng)目(15-140-36-A-1)
【分類(lèi)號(hào)】:S852.65

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