【摘要】：【目的】豬β-防御素(β-defensin)是豬自身分泌的一種能夠殺菌、調(diào)節(jié)免疫功能的小分子抗菌肽,是豬生長(zhǎng)繁殖不可缺少的蛋白質(zhì)�！痉椒ā扛鶕�(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的豬防御素cDNA序列,人工合成該基因序列,同時(shí)引入相關(guān)調(diào)控序列及適當(dāng)酶切位點(diǎn)。酶切該人工合成的DNA后,連接到表達(dá)載體p HT43中,然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌(Escherichia coli)DH5α,獲得的轉(zhuǎn)化子用于篩選重組表達(dá)質(zhì)粒。將獲得的重組表達(dá)質(zhì)粒p HT43-SS-BD轉(zhuǎn)化到枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WB800N中,獲得基因工程菌株。使用蔗糖誘導(dǎo)基因工程菌表達(dá)豬β-防御素,SDS-PAGE鑒定其分子量大小,抑菌試驗(yàn)測(cè)定其抑菌活性�！窘Y(jié)果】SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示在蔗糖誘導(dǎo)后得到約5 KDa的目的蛋白條帶;平板抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明,蔗糖誘導(dǎo)后的上清液對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌都有抑菌效果,而沒(méi)加蔗糖的對(duì)照組上清液無(wú)抑菌效果�！窘Y(jié)論】該研究實(shí)現(xiàn)豬β-防御素cDNA在枯草芽孢桿菌中的高效表達(dá),為解決抗菌肽來(lái)源限制及枯草芽孢桿菌的生產(chǎn)應(yīng)用奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] Porcine 尾-defensin (尾-defensin) is a small antibacterial peptide secreted by pig itself, which can kill bacteria and regulate immune function. [methods] according to the cDNA sequence of porcine defensin in NCBI database, the gene sequence was synthesized artificially, and the related regulatory sequence and appropriate enzyme site were introduced at the same time. The synthesized DNA was ligated into the expression vector p-HT43, and then transformed into E. coli (Escherichia coli) DH5 偽. The transformant was used to screen the recombinant expression plasmid. The recombinant expression plasmid p HT43-SS-BD was transformed into Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) WB800N to obtain the genetic engineering strain. Porcine 尾-defensin was expressed by sucrose-induced gene engineering bacteria, its molecular weight was identified by SDS-PAGE, and its bacteriostatic activity was determined by bacteriostatic test. [results] SDS-PAGE electrophoresis showed that the target protein band was about 5 KDa after sucrose induction. The results of plate bacteriostatic test showed that the supernatant induced by sucrose had antibacterial effect on both Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria. [conclusion] the high expression of porcine 尾-defensin cDNA in Bacillus subtilis was achieved in this study. It lays a technical foundation for solving the limitation of antibacterial peptides and the production and application of Bacillus subtilis.
【作者單位】： 成都大學(xué);四川華德生物工程有限公司;
【基金】：成都市科技惠民技術(shù)研發(fā)項(xiàng)目(2015-HM01-00176-SF)
【分類號(hào)】：S828

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