【摘要】：綿羊支原體肺炎(Mycoplasmal pneumonia,MP),是動(dòng)物傳染性疾病中影響較嚴(yán)重的疾病。近年來在新疆呈爆發(fā)性流行,給畜牧業(yè)帶來了一定的損失。甘露聚糖結(jié)合凝集素(Mannose-binding lectin,MBL)是肝臟合成分泌到血液中抗感染的天然免疫分子,它在抗原抗體產(chǎn)生特異性反應(yīng)之前,能激活誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng),被看成是天然免疫系統(tǒng)的重要成員。有研究證實(shí),MBL多態(tài)性與多種疾病有相關(guān)性,本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)MBL基因多態(tài)性和綿羊支原體肺炎抗性間有一定的相關(guān)性。為了理清MBL的含量高低與綿羊支原體感染的關(guān)系以及MBL發(fā)揮免疫效果的機(jī)制。本研究從綿羊個(gè)體水平和細(xì)胞水平,探究MBL抗綿羊肺炎支原體感染的機(jī)制,實(shí)驗(yàn)如下:⑴血清中不同MBL濃度綿羊人工感染肺炎支原體后體內(nèi)相關(guān)免疫因子變化規(guī)律研究:將血清中不同MBL濃度的綿羊分組,人工感染綿羊支原體(MO)后,檢測并分析MBL與多種免疫因子表達(dá)的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同MBL濃度的綿羊人工感染后血清中MBL濃度呈下降趨勢,隨著人工感染時(shí)間的延長,發(fā)生免疫水平不同的變化,其中MBL濃度較高的綿羊組其促炎因子IL-2、IFN-γ濃度比較較高,抗炎因子IL-4在人工感染后一天呈逐漸升高,此后開始下降;MBL低濃度的綿羊組人工感染后TNF-α濃度顯著升高,隨炎癥的舒緩,逐漸降低;人工感染后補(bǔ)體C1升高,其MBL濃度較低的綿羊組14d后升至最高,反映出該組綿羊病程更長,轉(zhuǎn)歸更慢;補(bǔ)體C3在人工感染后的表達(dá)先急劇升高再降低,MBL濃度較低的綿羊組下降比較緩慢。綜合人工感染后各免疫因子的表達(dá)變化情況,可知較高濃度MBL可以增加綿羊?qū)χгw肺炎的抗性。⑵綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)改良與細(xì)胞鑒定:呼吸道黏膜上皮細(xì)胞是一種很難獲得的細(xì)胞,作為向外開放的組織,很容易被許多種病原菌污染,培養(yǎng)難度較大,本研究以二型膠原酶加刮刷法消化氣管黏膜提取綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞,對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,并用免疫組化法對細(xì)胞進(jìn)行鑒定。⑶MBL對感染MO的體外培養(yǎng)綿羊粘膜上皮細(xì)胞的修復(fù)作用研究:先用PEG-6000從綿羊血清中粗提天然MBL,然后再利用Mannan-Aragarose親和層析對粗提的MBL進(jìn)行純化,從而得到比較純的目的蛋白,分別于原代培養(yǎng)綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞接種MO前后,加入純化的MBL蛋白,觀察細(xì)胞生長狀況并檢測感染前后免疫因子的變化。研究發(fā)現(xiàn)綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞感染支原體肺炎后ICAM-1基因和IL-6基因表達(dá)升高,MBL基因表達(dá)降低,各組之間相互比較無顯著性差異。在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中各組中細(xì)胞的凋亡率也沒有顯著性差異。但在支原體對綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞死亡率的影響實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),感染前加入MBL蛋白的組明顯比感染后加入MBL蛋白的組細(xì)胞存活率高。一定濃度的MBL對綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞對抗MO的感染效果比人工感染后追加MBL效果好。其可能原因是MBL在MO與綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞結(jié)合前起到保護(hù)作用,防止病原菌與細(xì)胞的結(jié)合;當(dāng)MO與綿羊氣管黏膜上皮細(xì)胞結(jié)合后追加的MBL卻沒有較好阻斷二者的結(jié)合的效果。本實(shí)驗(yàn)從綿羊個(gè)體水平和細(xì)胞水平,揭示了甘露糖結(jié)合凝集素在綿羊抗支原體感染中所起到的作用,豐富了甘露糖結(jié)合凝集素的研究,對深入研究MO的致病機(jī)理以及MBL的免疫效果與應(yīng)用提供了重要依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.26

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2427085