【摘要】：利用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增了禽源H9N2亞型豬流感病毒A/Swine/Guangxi/7/2007(H9N2)的8個(gè)目的基因片段,分別克隆至pBD雙向轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體。將8個(gè)重組質(zhì)粒純化后共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,54 h后收集上清,接種MDCK細(xì)胞。當(dāng)拯救的病毒在MDCK細(xì)胞上增殖至第3代時(shí),收集的細(xì)胞上清經(jīng)檢測(cè)具有血凝效價(jià)。經(jīng)過測(cè)序分析,確定獲救病毒的8個(gè)基因片段序列與野生株完全一致,表明病毒拯救成功。禽源H9N2亞型豬流感病毒反向遺傳操作技術(shù)平臺(tái)的成功建立為探索豬流感病毒致病機(jī)理、傳播機(jī)制與基因功能研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Eight target gene fragments of avian H9N2 subtype swine influenza virus A/Swine/Guangxi/7/2007 (H9N2) were amplified by RT-PCR and cloned into pBD bidirectional transcriptional expression vector. Eight recombinant plasmids were purified and transfected into 293T cells. The supernatants were collected and inoculated into MDCK cells 54 h later. When the rescued virus proliferated into the third passage of MDCK cells, the supernatant of the collected cells showed hemagglutination titer. The sequence analysis showed that the sequence of 8 gene fragments of the rescued virus was completely consistent with that of the wild strain, which indicated that the virus was successfully rescued. The successful establishment of the platform for reverse genetic manipulation of avian H9N2 subtype swine influenza virus lays a foundation for exploring the pathogenic mechanism, transmission mechanism and gene function of swine influenza virus.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】：上海市自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(16ZR1444000) 中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(2015JB07) 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院創(chuàng)新工程“豬病毒性繁殖障礙綜合癥團(tuán)隊(duì)”項(xiàng)目
【分類號(hào)】：S852.651

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本文編號(hào)：2424984