發(fā)布時(shí)間：2019-02-16 16:37

【摘要】：豬傳染性胃腸炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)是豬的一種急性,高度接觸性傳染病。該病由豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)引起。各種年齡及品種的豬對TGE均易感,其中2周齡以下仔豬的死亡率可達(dá)100%,嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。本研究分別合成了編碼TGEV纖突蛋白(spike蛋白)線性抗原位點(diǎn)C和D的核苷酸片段,正反鏈退火后分別克隆至原核表達(dá)載體pET32a中,重組質(zhì)粒分別命名為pET32a-C1C2和pET32a-D。同時(shí)將D片段克隆至重組質(zhì)粒pET32a-C1C2中,重組質(zhì)粒命名為pET32a-C1C2D。將上述3種重組質(zhì)粒pET32a-C1C2、pET32a-D和pET32a-C1C2D分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3),重組菌經(jīng)1.0 mmol/L的IPTG誘導(dǎo)4 h后,分別表達(dá)出21 kDa、22 kDa和25 kDa的重組蛋白。重組蛋白切膠純化。Western blot和Dot-ELISA檢測結(jié)果表明,3種重組蛋白能被TGEV陽性血清識別。對重組蛋白誘導(dǎo)時(shí)間和IPTG濃度等表達(dá)條件進(jìn)行了初步優(yōu)化。重組菌Rosetta(DE3)(pET32a-C1C2)重組蛋白表達(dá)量從38.0%提高到41.4%;重組菌Rosetta(DE3)(pET32a-D)重組蛋白表達(dá)量從30.9%提高到33.8%;重組菌Rosetta(DE3)(pET32a-C1C2D)重組蛋白表達(dá)量從15.7%提高到26.5%。本研究為TGEV血清學(xué)診斷方法的研究及建立提供了必要的物質(zhì)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Infectious gastroenteritis (Transmissible gastroenteritis,TGE) is an acute and highly contagious disease in pigs. The disease is caused by porcine infectious gastroenteritis virus (Transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV). Pigs of all ages and breeds are susceptible to TGE, and the mortality rate of piglets under 2 weeks of age can reach 100%, which seriously harms the development of pig industry. In this study, nucleotide fragments encoding linear antigen sites C and D of TGEV fibrin (spike) protein were synthesized and cloned into prokaryotic expression vector pET32a after annealing. The recombinant plasmids were named pET32a-C1C2 and pET32a-D., respectively. At the same time, the D fragment was cloned into the recombinant plasmid pET32a-C1C2, and the recombinant plasmid was named pET32a-C1C2D.. The three recombinant plasmids pET32a-C1C2,pET32a-D and pET32a-C1C2D were transformed into Escherichia coli Rosetta (DE3), respectively. The recombinant proteins of 21 kDa,22 kDa and 25 kDa were expressed after 4 h induction by 1.0 mmol/L IPTG. The results of. Western blot and Dot-ELISA detection showed that the three recombinant proteins could be recognized by TGEV positive serum. The expression conditions of recombinant protein such as induction time and IPTG concentration were preliminarily optimized. The recombinant protein expression of Rosetta (DE3) (pET32a-C1C2) was increased from 38.0% to 41.4%, and that of Rosetta (DE3) (pET32a-D) was increased from 30.9% to 33.8%. The recombinant protein expression of Rosetta (DE3) (pET32a-C1C2D) increased from 15. 7% to 26. 5%. This study provides the necessary material basis for the study and establishment of TGEV serological diagnosis method.
【學(xué)位授予單位】：齊齊哈爾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.651

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本文編號：2424637