【摘要】：旨在分析雞內(nèi)源ev21病毒與慢羽的連鎖關(guān)系及其結(jié)構(gòu)特征和啟動子活性,為建立無內(nèi)源ev21病毒的慢羽種雞提供檢測方法,并對ev21的啟動轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行探索。長片段PCR擴(kuò)增獲得雞內(nèi)源ev21病毒基因序列,檢測太行雞、壩上長尾雞、海蘭褐、海蘭灰及其祖代五個品系259份樣本的病毒攜帶情況。利用NCBI數(shù)據(jù)庫Blast比對分析并PCR獲得病毒基因全長。構(gòu)建ev21基因5′和3′LTR區(qū)的pGL3-basic重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A375細(xì)胞檢測其啟動子活性。結(jié)果顯示:獲得完整ev21病毒基因組全長7 524bp,發(fā)現(xiàn)其反向插入在雞Z染色體g.10681671-10681672之間,長片段7 590bp PCR檢測發(fā)現(xiàn)ev21與海蘭灰慢羽雞完全連鎖,但與太行雞、壩上長尾雞和海蘭褐慢羽并不完全連鎖,尤其海蘭褐快羽公雞ev21全部陽性。ev21基因5′LTR區(qū)具有高強(qiáng)度的啟動子活性(P0.01),3′LTR區(qū)活性高于陰性對照,但差異不顯著(P0.05)。綜上,內(nèi)源ev21病毒與雞慢羽性狀并不完全連鎖,7 590bp長片段PCR為內(nèi)源ev21病毒的篩查提供檢測方法,ev21基因5′LTR區(qū)具有強(qiáng)啟動子活性。
[Abstract]:The aim of this study was to analyze the linkage relationship between chicken endogenous ev21 virus and slow feather, its structural characteristics and promoter activity, to provide a method for the detection of ev21 without endogenous ev21 virus, and to explore the transcriptional activity of ev21. The gene sequence of chicken endogenous ev21 virus was amplified by long fragment PCR. The virus was carried out in 259 samples of Taihang chicken, Bashang long-tailed chicken, Hailan brown, Hailan ash and their ancestors. The full length of virus gene was obtained by Blast comparison and PCR analysis in NCBI database. The promoter activity of A375 cells was detected by transfection of pGL3-basic recombinant plasmid of ev21 gene 5 'and 3'LTR region. The results showed that the complete genome length of ev21 virus was 7 524bp. it was found that the whole genome was inserted into chicken Z chromosome g.10681671-10681672. The long fragment 7 590bp PCR showed that ev21 was completely linked to Hailan grey slow-feathered chicken, but it was found to be linked to Taihang chicken. The long tail chicken and the slow hairy feather of Hailan were not completely linked to each other, especially the ev21 fast feathering cock was all positive for ev21. The 5'LTR region of the ev21 gene had high activity of promoter (P0.01), and the activity of the 3'LTR region was higher than that of the negative control. But the difference was not significant (P0.05). In conclusion, the endogenous ev21 virus is not completely linked to chicken slow-feathering traits. The 7 590bp long fragment PCR provides a method for the screening and detection of endogenous ev21 virus. The 5'LTR region of ev21 gene has strong promoter activity.
【作者單位】： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;西北農(nóng)林科技大學(xué)動物科技學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧研究所;河北科技師范學(xué)院;
【基金】：河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)體系蛋雞產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(HBCT2013090206) 河北省自然基金項目(C2015204176)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2414829