【摘要】：豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)以引起仔豬、保育豬呼吸系統(tǒng)障礙以及母豬繁殖障礙為特征,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。PRRSV為單鏈RNA病毒,屬于動脈炎病毒科,含有9個開放閱讀框。病毒主要分為兩個亞型:北美洲型VR-2332和歐洲型LV。2006年中國爆發(fā)了一場規(guī)模巨大的“豬高熱癥”,引起該病的病毒不同于之前的PRRSV,其致病力強,以高熱、高致病性和高致死率為特征,經(jīng)過基因分析確定,這類型的病毒為VR-2332的變異毒株,又稱HP-PRRSV。HP-PRRSV病毒在Nsp2當(dāng)中相比于經(jīng)典株有90個堿基缺失,并且該突變能夠穩(wěn)定遺傳。本實驗首先利用Hu N4毒株通過滴鼻的方法感染仔豬,建立病毒模型。在第5、7、14天分別剖殺實驗組與對照組樣本,固定組織,制成石蠟切片。通過HE染色與免疫熒光組織化學(xué)法觀察組織學(xué)變化,檢測病毒分部。分析Nsp2上穩(wěn)定的序列合成寡聚核苷酸熒光標記探針,通過熒光原位雜交法檢測相應(yīng)組織樣品,并且對黑龍江地區(qū)50個病例進行檢查。實驗結(jié)果顯示,機體肺臟以及淋巴結(jié)最先出現(xiàn)病變。肺部出血、水腫、充血嚴重,出現(xiàn)實變和壞死灶,淋巴結(jié)水腫至正常的2-10倍,出現(xiàn)針尖樣出血。肝臟和脾臟出現(xiàn)不同程度的水腫和出血。腎臟腫脹或者萎縮,有出血點。組織學(xué)觀察可看到典型的間質(zhì)性肺炎,淋巴結(jié)和脾臟淋巴細胞大量減少并且壞死,可觀察到大量巨噬細胞,有單核細胞和炎性細胞的浸潤。免疫熒光組織化學(xué)可觀察病毒在機體各個器官的分布規(guī)律,結(jié)果表明感染第五天,可在淋巴結(jié)和肺臟、脾臟檢測到陽性信號,第七天可從腎臟、肝臟看到明顯病毒顆粒,但是信號較少。心臟、胰腺在整個實驗過程中均呈現(xiàn)出陰性反應(yīng)。應(yīng)用熒光原位雜交法檢測各個組織,結(jié)果顯示陽性信號主要分布于肺臟的肺泡間隔當(dāng)中的巨噬細胞以及血管內(nèi)皮細胞,淋巴結(jié)當(dāng)中的淋巴小結(jié)以及脾臟當(dāng)中的淋巴細胞與巨噬細胞。肝臟陽性信號主要出現(xiàn)于竇狀隙,腎臟主要分布于腎小球以及腎間質(zhì)。本實驗建立熒光原位雜交法與免疫熒光法和病理組織學(xué)觀察結(jié)果進行比較,發(fā)現(xiàn)原位雜交與免疫熒光結(jié)果相符,兩者均與病理組織學(xué)情況一致。
[Abstract]:Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus (Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV), characterized by respiratory disorders in piglets, conservation of respiratory disorders in pigs and reproductive disorders in sows, has brought huge economic losses to the pig industry. PRRSV is a single-stranded RNA virus. Belongs to the arteritis virus family, contains 9 open reading boxes. The virus is divided into two subtypes: North American type VR-2332 and European type LV.2006. A huge outbreak of "swine hyperthermia" occurred in China in 2003. The virus causing the disease is different from the previous PRRSV, which is highly virulent and highly febrile. The characteristics of high pathogenicity and high mortality are identified by gene analysis. This type of virus is a variant strain of VR-2332, which is also called HP-PRRSV.HP-PRRSV virus with 90 base deletions compared with classical strains in Nsp2. And the mutation can be inherited stably. In this experiment, Hu N4 strain was first used to infect piglets by nasal drip, and the virus model was established. The samples of the experimental group and the control group were dissected and fixed on the 5th day, and the paraffin sections were made. The histological changes were observed by HE staining and immunofluorescence histochemistry. The stable sequence-synthesized oligonucleotide fluorescent labeled probes on Nsp2 were analyzed. The corresponding tissue samples were detected by fluorescence in situ hybridization and 50 cases in Heilongjiang province were examined. The results showed that lung and lymph nodes were the first lesions. Pulmonary hemorrhage, edema, severe hyperemia, actual changes and necrosis, lymph node edema to normal 2-10 times, needle-like bleeding. Various degrees of edema and bleeding occurred in the liver and spleen. Kidney swelling or atrophy, with bleeding spots. Histologically it was observed that typical interstitial pneumonia lymph node and spleen lymphocytes were decreased and necrotic a large number of macrophages and infiltration of monocytes and inflammatory cells could be observed. Immunofluorescence histochemistry could observe the distribution of virus in various organs of the body. The results showed that on the fifth day of infection, positive signals could be detected in lymph nodes, lungs, spleen, and obvious viral particles could be seen in the kidney and liver on the seventh day. But the signal is less. The heart and pancreas showed negative reactions throughout the experiment. Fluorescence in situ hybridization was used to detect various tissues. The results showed that the positive signals were mainly distributed in macrophages and vascular endothelial cells in the alveolar septum of the lung. Lymphatic nodules in lymph nodes and lymphocytes and macrophages in spleen. Liver positive signal mainly appeared in sinusoid space, kidney mainly distributed in glomeruli and renal interstitial. The results of fluorescence in situ hybridization were compared with those of immunofluorescence and histopathological observation. The results of in situ hybridization were consistent with those of immunofluorescence, and both of them were consistent with histopathology.
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【共引文獻】

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本文編號：2413376