【摘要】：I型IFN能抑制多種病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)以及細(xì)菌和病毒的混合感染,在豬病防治中引起了關(guān)注。IRF3和IRF7在I型IFN的表達(dá)和分泌上均發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用,二者都能被LPS激活,發(fā)生磷酸化,進(jìn)而調(diào)節(jié)I型IFN的表達(dá)和分泌。目前對(duì)IRF3和IRF7的研究主要集中在人和鼠,有關(guān)豬IRF3和IRF7基因功能的研究較少。本文利用PB載體系統(tǒng)構(gòu)建豬IRF3和IRF7基因真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染PK15細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞能否發(fā)出綠色熒光,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中IRF3和IRF7基因mRNA表達(dá)水平,建立過(guò)表達(dá)IRF3和IRF7基因的細(xì)胞系;LPS和LiCl處理細(xì)胞,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)TLR4信號(hào)通路中關(guān)鍵基因mRNA的表達(dá)水平,探討IRF3和IRF7對(duì)TLR4介導(dǎo)的信號(hào)通路的作用,為進(jìn)一步揭示IRF3和IRF7在豬病防治中的作用機(jī)制提供前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染細(xì)胞在熒光顯微鏡下發(fā)出綠色熒光,實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,與空載體轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染PB-IRF3和PB-IRF7的細(xì)胞中IRF3和IRF7 mRNA表達(dá)水平顯著升高,差異極顯著(P0.001),表明IRF3和IRF7基因在PK15細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了過(guò)表達(dá);與空載體轉(zhuǎn)染組相比,IRF3和IRF7基因轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中My D88、TRAF6、TBK1、NF-κB和IFNαmRNA表達(dá)水平高,IL-6 mRNA表達(dá)水平低,且IRF3轉(zhuǎn)染組中My D88、TBK1和IL-6 mRNA表達(dá)差異顯著(P0.05),IRF7轉(zhuǎn)染組中TRAF6和IFNαmRNA表達(dá)差異顯著(P0.05),其余基因表達(dá)差異不顯著;LPS處理后,空載體轉(zhuǎn)染組及IRF3和IRF7基因轉(zhuǎn)染組中上述被檢測(cè)基因mRNA表達(dá)水平均升高,IRF3轉(zhuǎn)染組中IFNα和IL-6 mRNA表達(dá)差異顯著(P0.05),IRF7轉(zhuǎn)染組中IFNα和NF-κB mRNA表達(dá)差異顯著(P0.05),其余基因表達(dá)差異不顯著;LiCl抑制LPS激活的TBK1活性后,IRF3和IRF7的表達(dá)水平發(fā)生下調(diào),空載體轉(zhuǎn)染組及IRF3和IRF7基因轉(zhuǎn)染組中My D88、TRAF6、TBK1、NF-κB和IFNαmRNA表達(dá)水平下降,IL-6 mRNA表達(dá)水平上升。IRF3基因轉(zhuǎn)染組中My D88、TBK1、IL-6和IFNαmRNA表達(dá)差異顯著(P0.05),IRF7基因轉(zhuǎn)染組中TRAF6、TBK1和IFNαmRNA表達(dá)差異顯著(P0.05)。結(jié)果表明,豬IRF3和IRF7基因能提高PK15細(xì)胞中上游分子TBK1和下游基因IFNαmRNA表達(dá),降低TLR4介導(dǎo)的信號(hào)通路中的炎性基因IL-6 mRNA的表達(dá),提高炎性基因上游分子My D88、TRAF6、NF-κB等基因mRNA的表達(dá)。提示IRF3和IRF7不僅誘導(dǎo)I型IFN的表達(dá),還參與LPS激活的TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)過(guò)程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S828

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 張維平;郭維宵;劉海云;張學(xué)慧;楊振國(guó);;chTLR4及其信號(hào)通路在脂多糖致雞淋巴細(xì)胞中的作用[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2011年03期

2 何自標(biāo);蘭瑞霞;陳晨;劉淑君;石溢;陳仕毅;賴(lài)松家;張明;;脂多糖對(duì)母兔下丘腦、卵巢、輸卵管中TLR4及其相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年06期

3 ;[J];;年期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 林昌松;梁江;劉清平;徐強(qiáng);林云斌;;斷藤益母湯對(duì)人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞增殖和TLR4表達(dá)的影響[A];第17次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

2 唐成和;常曉;曹銀利;尚云;石計(jì)朋;;腦室周?chē)踪|(zhì)軟化大鼠腦組織TLR4表達(dá)變化及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2012年

3 岳增輝;何新群;常小榮;袁建菱;郁保生;符凌;張亮;商李超;;隔藥餅灸對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔主動(dòng)脈TLR4的影響[A];2011中國(guó)針灸學(xué)會(huì)年會(huì)論文集（摘要）[C];2011年

4 曹家麟;吳春明;朱小區(qū);歐陽(yáng)欽;蘇林紅;黃強(qiáng);林麗;;二草清肝湯預(yù)處理對(duì)小鼠內(nèi)毒素性肝損傷的作用及對(duì)肝臟TLR4表達(dá)的影響[A];第二十次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 曹珊;王晶桐;劉玉蘭;;幽門(mén)螺旋桿菌感染后胃黏膜TLR4表達(dá)水平同炎癥相關(guān)性的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上冊(cè)）[C];2007年

6 吳春明;曹家麟;朱小區(qū);歐陽(yáng)欽;蘇林紅;;二草清肝湯預(yù)處理對(duì)小鼠內(nèi)毒素性肝損傷的作用及對(duì)肝臟TLR4表達(dá)的影響[A];2011年長(zhǎng)江三角洲中醫(yī)肝病協(xié)作組學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)肝病分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)文集[C];2011年

7 曹家麟;吳春明;朱小區(qū);歐陽(yáng)欽;蘇林紅;;二草清肝湯預(yù)處理對(duì)小鼠內(nèi)毒素性肝損傷的作用及對(duì)肝臟TLR4表達(dá)的影響[A];浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第二屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨2012年學(xué)術(shù)年會(huì)文集[C];2012年

8 曹家麟;吳春明;朱小區(qū);歐陽(yáng)欽;蘇林紅;黃強(qiáng);林麗;;二草清肝湯預(yù)處理對(duì)小鼠內(nèi)毒素性肝損傷的作用及對(duì)肝臟TLR4表達(dá)的影響[A];第6屆全國(guó)疑難及重癥肝病大會(huì)論文集[C];2011年

9 徐順貴;;全氟化碳對(duì)脂多糖激活大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

10 楊再興;梁艷;仲人前;;TLR4在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中的表達(dá)、臨床意義及其致病機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 朱海濤;TLR4在創(chuàng)傷性腦損傷急性炎癥損傷中的作用機(jī)制及姜黃素的保護(hù)效應(yīng)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

2 梁艷;TLR4通路誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在原發(fā)性膽汁性肝硬化中的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 張建軍;TLR4受體及其信號(hào)通路在胰腺癌進(jìn)展中的作用[D];華中科技大學(xué);2010年

4 耿紅蓮;TLR4介導(dǎo)氧化型低密度脂蛋白致動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

5 華東;TLR4信號(hào)通路介導(dǎo)的前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究[D];蘇州大學(xué);2011年

6 黃麗華;蒙藥特潤(rùn)舒都樂(lè)水母液浸膏及其主要單體通過(guò)TLR4的抗炎信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊莎莎;辛伐他汀阻抑實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠腦內(nèi)TLR4介導(dǎo)的繼發(fā)性炎癥損傷[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 師維雅;2型糖尿病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLR4信號(hào)的表達(dá)與大血官病變的相關(guān)性研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

3 宋雪;SE對(duì)TLR4信號(hào)通路調(diào)節(jié)雛雞空回腸pIgR表達(dá)的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 劉瑞;黃芪多糖影響雛雞免疫器官TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 何自標(biāo);LPS對(duì)母兔下丘腦、卵巢和輸卵管中TLR4、TLR2及其相關(guān)免疫細(xì)胞因子表達(dá)的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 白靜;氯沙坦對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷中TLR4表達(dá)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2014年

7 關(guān)艷敬;豬IRF3和IRF7基因?qū)LR4信號(hào)通路中關(guān)鍵基因表達(dá)的影響[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 潘慧;TLR4通路在酒精性慢性胰腺炎作用機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

9 張玉;腦室周?chē)踪|(zhì)軟化大鼠腦組織TLR4表達(dá)變化及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2012年

10 何新群;隔藥餅灸抑制TLR4延遲動(dòng)脈粥樣硬化形成機(jī)制的研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：2412787