【摘要】：I型IFN能抑制多種病毒、細菌、寄生蟲以及細菌和病毒的混合感染,在豬病防治中引起了關(guān)注。IRF3和IRF7在I型IFN的表達和分泌上均發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用,二者都能被LPS激活,發(fā)生磷酸化,進而調(diào)節(jié)I型IFN的表達和分泌。目前對IRF3和IRF7的研究主要集中在人和鼠,有關(guān)豬IRF3和IRF7基因功能的研究較少。本文利用PB載體系統(tǒng)構(gòu)建豬IRF3和IRF7基因真核表達載體,轉(zhuǎn)染PK15細胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選,熒光顯微鏡觀察細胞能否發(fā)出綠色熒光,實時定量PCR檢測細胞中IRF3和IRF7基因mRNA表達水平,建立過表達IRF3和IRF7基因的細胞系;LPS和LiCl處理細胞,實時定量PCR檢測TLR4信號通路中關(guān)鍵基因mRNA的表達水平,探討IRF3和IRF7對TLR4介導(dǎo)的信號通路的作用,為進一步揭示IRF3和IRF7在豬病防治中的作用機制提供前期實驗基礎(chǔ)。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染細胞在熒光顯微鏡下發(fā)出綠色熒光,實時定量PCR結(jié)果顯示,與空載體轉(zhuǎn)染組相比,轉(zhuǎn)染PB-IRF3和PB-IRF7的細胞中IRF3和IRF7 mRNA表達水平顯著升高,差異極顯著(P0.001),表明IRF3和IRF7基因在PK15細胞中實現(xiàn)了過表達;與空載體轉(zhuǎn)染組相比,IRF3和IRF7基因轉(zhuǎn)染組細胞中My D88、TRAF6、TBK1、NF-κB和IFNαmRNA表達水平高,IL-6 mRNA表達水平低,且IRF3轉(zhuǎn)染組中My D88、TBK1和IL-6 mRNA表達差異顯著(P0.05),IRF7轉(zhuǎn)染組中TRAF6和IFNαmRNA表達差異顯著(P0.05),其余基因表達差異不顯著;LPS處理后,空載體轉(zhuǎn)染組及IRF3和IRF7基因轉(zhuǎn)染組中上述被檢測基因mRNA表達水平均升高,IRF3轉(zhuǎn)染組中IFNα和IL-6 mRNA表達差異顯著(P0.05),IRF7轉(zhuǎn)染組中IFNα和NF-κB mRNA表達差異顯著(P0.05),其余基因表達差異不顯著;LiCl抑制LPS激活的TBK1活性后,IRF3和IRF7的表達水平發(fā)生下調(diào),空載體轉(zhuǎn)染組及IRF3和IRF7基因轉(zhuǎn)染組中My D88、TRAF6、TBK1、NF-κB和IFNαmRNA表達水平下降,IL-6 mRNA表達水平上升。IRF3基因轉(zhuǎn)染組中My D88、TBK1、IL-6和IFNαmRNA表達差異顯著(P0.05),IRF7基因轉(zhuǎn)染組中TRAF6、TBK1和IFNαmRNA表達差異顯著(P0.05)。結(jié)果表明,豬IRF3和IRF7基因能提高PK15細胞中上游分子TBK1和下游基因IFNαmRNA表達,降低TLR4介導(dǎo)的信號通路中的炎性基因IL-6 mRNA的表達,提高炎性基因上游分子My D88、TRAF6、NF-κB等基因mRNA的表達。提示IRF3和IRF7不僅誘導(dǎo)I型IFN的表達,還參與LPS激活的TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)過程。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S828

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本文編號：2412787