發(fā)布時(shí)間：2019-01-16 01:23

【摘要】：豬流感(Swine influenza,SI),是由豬流感病毒(Swine influenza virus,SIV)引起的一種在豬群常發(fā)的急性、熱性、傳染性呼吸道疾病,其普遍存在于豬群中且根除困難。流感病毒具有較強(qiáng)的宿主選擇特異性,自然條件下禽流感病毒和人流感病毒不會(huì)發(fā)生基因重組,但研究表明兩者可以通過(guò)豬這一中間宿主來(lái)實(shí)現(xiàn)重組變異產(chǎn)生新毒株。其原因?yàn)?豬體細(xì)胞表面同時(shí)具有a-2,3半乳糖苷唾液酸受體和a-2,6半乳糖苷唾液酸受體,其中前者對(duì)禽流感病毒有較強(qiáng)的親嗜性,后者對(duì)人流感病毒有較強(qiáng)的親和性,所以豬體可以同時(shí)感染人、禽、豬流感病毒,扮演著流感“混合器”的角色。采用血清學(xué)監(jiān)測(cè)方法對(duì)豬流感的流行與分布情況進(jìn)行調(diào)查,對(duì)流行的豬流感病毒毒株進(jìn)行分離鑒定與遺傳演化分析,具有重要的經(jīng)濟(jì)學(xué)價(jià)值和公共衛(wèi)生學(xué)意義。山東位于黃河下游,東臨渤海、黃海,與朝鮮半島、日本列島隔海相望,且為候鳥(niǎo)遷徙途經(jīng)路段,候鳥(niǎo)的遷徙擴(kuò)增了流感病毒的基因庫(kù),加上山東是養(yǎng)豬大省,豬流感時(shí)有發(fā)生,對(duì)山東省豬流感病毒進(jìn)行分離鑒定及遺傳演化分析意義重大。本實(shí)驗(yàn)以山東作為實(shí)驗(yàn)地點(diǎn),對(duì)2013-2014年間送檢的山東省各地區(qū)的豬血清樣本共計(jì)1049份,用H1亞型豬流感病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行抗體檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn):豬流感在春冬兩季抗體陽(yáng)性率高,尤其是兩季度中的12月份和3月份,分別為66.63%、55.90%;山東省內(nèi)的魯南和魯西南地區(qū),豬流感的抗體陽(yáng)性檢出率相對(duì)較高,分別為56.8%、55.3%,在膠東地區(qū)的抗體陽(yáng)性檢出率較低,僅為9.6%。在山東省各地采集豬鼻拭子接10日齡的SPF雞胚,分別在ZC、NJ兩地各分離到一株豬流感病毒毒株,命名為:A/Swine/ZC/90/2014(H1N1)、A/Swine/NJ/03/2014(H1N1)。參照NCBI中已發(fā)表序列設(shè)計(jì)引物,經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增8片段,膠回收產(chǎn)物與pMD-18T載體連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)Trans5a感受態(tài),挑選陽(yáng)性質(zhì)粒進(jìn)行單克隆測(cè)序,并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析。兩株分離株HA均含有7個(gè)糖基化位點(diǎn),其中5個(gè)在HA1,2個(gè)在HA2;裂解位點(diǎn)均為QSR/GL,中間沒(méi)有多個(gè)堿性氨基酸的插入,為低致病性的豬流感。兩株分離株的HA、M、NA、NP基因與H1N1豬流感病毒的同源性最高,而NS、PA、PB1、PB2基因與H3N2豬流感病毒的同源性最高,推斷兩株分離株有可能是由H1N1豬流感病毒與H3N2豬流感病毒重組變異而來(lái)。分離株A/Swine/ZC/90/2014(H1N1)在雞胚上進(jìn)行傳代,并對(duì)E20代的病毒測(cè)序分析,與原代病毒進(jìn)行比對(duì),查看變異位點(diǎn),推斷變異趨勢(shì),篩選疫苗候選毒株。比對(duì)結(jié)果顯示:截止到E20代,分離株A/Swine/ZC/90/2014(H1N1)在個(gè)別位點(diǎn)發(fā)生變異,HA、NP蛋白分別有3個(gè)和2個(gè)氨基酸變異位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)還針對(duì)分離到的A/Swine/ZC/90/2014(H1N1)毒株制備了高免血清,采用HI試驗(yàn)和ELISA檢測(cè)對(duì)抗體效價(jià)進(jìn)行監(jiān)測(cè),結(jié)果顯示抗體水平在第六周時(shí)達(dá)到高免血清滴度,若不及時(shí)收集抗體水平會(huì)有下降的趨勢(shì),對(duì)制備的高免血清用間接免疫熒光試驗(yàn)進(jìn)行了驗(yàn)證,熒光信號(hào)檢測(cè)顯示制備的高免血清特異性良好。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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1 顏健華;梁丹潔;李春英;徐賢坤;胡巧云;孫翔翔;何奇松;熊毅;;H1N1豬流感病毒廣西分離株HA基因序列分析[J];南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2013年07期

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本文編號(hào)：2409306