【摘要】：豬流感(Swine influenza,SI),是由豬流感病毒(Swine influenza virus,SIV)引起的一種在豬群常發(fā)的急性、熱性、傳染性呼吸道疾病,其普遍存在于豬群中且根除困難。流感病毒具有較強的宿主選擇特異性,自然條件下禽流感病毒和人流感病毒不會發(fā)生基因重組,但研究表明兩者可以通過豬這一中間宿主來實現(xiàn)重組變異產(chǎn)生新毒株。其原因為:豬體細胞表面同時具有a-2,3半乳糖苷唾液酸受體和a-2,6半乳糖苷唾液酸受體,其中前者對禽流感病毒有較強的親嗜性,后者對人流感病毒有較強的親和性,所以豬體可以同時感染人、禽、豬流感病毒,扮演著流感“混合器”的角色。采用血清學(xué)監(jiān)測方法對豬流感的流行與分布情況進行調(diào)查,對流行的豬流感病毒毒株進行分離鑒定與遺傳演化分析,具有重要的經(jīng)濟學(xué)價值和公共衛(wèi)生學(xué)意義。山東位于黃河下游,東臨渤海、黃海,與朝鮮半島、日本列島隔海相望,且為候鳥遷徙途經(jīng)路段,候鳥的遷徙擴增了流感病毒的基因庫,加上山東是養(yǎng)豬大省,豬流感時有發(fā)生,對山東省豬流感病毒進行分離鑒定及遺傳演化分析意義重大。本實驗以山東作為實驗地點,對2013-2014年間送檢的山東省各地區(qū)的豬血清樣本共計1049份,用H1亞型豬流感病毒ELISA抗體檢測試劑盒進行抗體檢測。檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn):豬流感在春冬兩季抗體陽性率高,尤其是兩季度中的12月份和3月份,分別為66.63%、55.90%;山東省內(nèi)的魯南和魯西南地區(qū),豬流感的抗體陽性檢出率相對較高,分別為56.8%、55.3%,在膠東地區(qū)的抗體陽性檢出率較低,僅為9.6%。在山東省各地采集豬鼻拭子接10日齡的SPF雞胚,分別在ZC、NJ兩地各分離到一株豬流感病毒毒株,命名為:A/Swine/ZC/90/2014(H1N1)、A/Swine/NJ/03/2014(H1N1)。參照NCBI中已發(fā)表序列設(shè)計引物,經(jīng)RT-PCR擴增8片段,膠回收產(chǎn)物與pMD-18T載體連接,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)Trans5a感受態(tài),挑選陽性質(zhì)粒進行單克隆測序,并對測序結(jié)果進行遺傳進化分析。兩株分離株HA均含有7個糖基化位點,其中5個在HA1,2個在HA2;裂解位點均為QSR/GL,中間沒有多個堿性氨基酸的插入,為低致病性的豬流感。兩株分離株的HA、M、NA、NP基因與H1N1豬流感病毒的同源性最高,而NS、PA、PB1、PB2基因與H3N2豬流感病毒的同源性最高,推斷兩株分離株有可能是由H1N1豬流感病毒與H3N2豬流感病毒重組變異而來。分離株A/Swine/ZC/90/2014(H1N1)在雞胚上進行傳代,并對E20代的病毒測序分析,與原代病毒進行比對,查看變異位點,推斷變異趨勢,篩選疫苗候選毒株。比對結(jié)果顯示:截止到E20代,分離株A/Swine/ZC/90/2014(H1N1)在個別位點發(fā)生變異,HA、NP蛋白分別有3個和2個氨基酸變異位點。實驗還針對分離到的A/Swine/ZC/90/2014(H1N1)毒株制備了高免血清,采用HI試驗和ELISA檢測對抗體效價進行監(jiān)測,結(jié)果顯示抗體水平在第六周時達到高免血清滴度,若不及時收集抗體水平會有下降的趨勢,對制備的高免血清用間接免疫熒光試驗進行了驗證,熒光信號檢測顯示制備的高免血清特異性良好。
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【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【參考文獻】

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本文編號：2409306