【摘要】：為制備豬骨骼肌肌球蛋白輕鏈激酶(skMLCK)的特異性單克隆抗體,設(shè)計(jì)合成多肽并與載體蛋白偶聯(lián),經(jīng)細(xì)胞融合、培養(yǎng)基篩選、陽性細(xì)胞的檢測與單克隆化后,獲得3株能穩(wěn)定分泌抗skMLCK單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株;種植BALB/c小鼠腹腔,收集腹水,純化后得到skMLCK的單克隆抗體。分別應(yīng)用高效液相色譜、質(zhì)譜和Western blot對純化單克隆抗體進(jìn)行抗體純度、效價和敏感性檢測。結(jié)果顯示:獲得的豬skMLCK單克隆抗體,能特異性識別skMLCK純化蛋白、豬肌肉組織的內(nèi)源性蛋白。本試驗(yàn)成功制備了能特異性結(jié)合豬skMLCK的單克隆抗體,這為今后進(jìn)一步研究探討skMLCK對豬肌肉發(fā)育的影響提供物質(zhì)基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to prepare specific monoclonal antibody against porcine skeletal myosin light streptokinase (skMLCK), the peptide was designed and conjugated with carrier protein. Three hybridoma cell lines were obtained which could stably secrete monoclonal antibodies against skMLCK. BALB/c mice were implanted intraperitoneally, ascites were collected, and monoclonal antibodies against skMLCK were obtained after purification. The purity, titer and sensitivity of purified monoclonal antibody were detected by high performance liquid chromatography, mass spectrometry and Western blot, respectively. The results showed that the obtained monoclonal antibody to porcine skMLCK could specifically recognize the purified protein of skMLCK and the endogenous protein of porcine muscle tissue. In this study, monoclonal antibodies capable of specifically binding porcine skMLCK were successfully prepared, which provided a material basis for further study on the effects of skMLCK on pig muscle development.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院;遼寧省畜產(chǎn)品質(zhì)量與安全工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31272415) 科技部國家星火計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(2015GA650005) 遼寧省自然科學(xué)基金(2015020765) 遼寧省科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目(2015211003) 錦州醫(yī)科大學(xué)第二批領(lǐng)軍人物團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目
【分類號】：S828

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2379873