【摘要】：噬菌體是一類病毒,因其主要感染細(xì)菌,又叫作細(xì)菌病毒。廣泛存在于自然界且種類復(fù)雜多樣。近半個世紀(jì)以來,隨著養(yǎng)殖密度的增加及抗生素?zé)o節(jié)制濫用,大量耐藥菌株不斷出現(xiàn)。噬菌體的天然殺菌能力,可作為治療細(xì)菌感染的有效手段,正被人們廣泛關(guān)注。本課題運用直接法從聊城市某現(xiàn)代化肉雞養(yǎng)殖場采集污水、糞便和墊料等樣品,分離、鑒定出20株沙門氏菌作為宿主菌。樣品經(jīng)宿主菌懸液富集,利用雙層瓊脂平板法以及液體純化法分離并純化得到3株沙門氏菌裂解性噬菌體PS5、PS8、PS11。通過宿主菌感染實驗分別測定了噬菌體宿主譜、效價、溫度和PH的穩(wěn)定性、最佳感染復(fù)數(shù)、一步繁殖曲線以及4℃保存效價的衰減規(guī)律,并測定了噬菌體的抑菌活性及不同時長、不同效價噬菌體處理沙門氏菌的規(guī)律。結(jié)果將為利用噬菌體防治沙門氏菌提供科學(xué)依據(jù),具有重要理論意義和應(yīng)用價值。研究主要內(nèi)容如下:1.噬菌體形態(tài)學(xué)觀察以分離到的沙門氏菌為宿主,從樣品中分離并純化出3株噬菌體PS5、PS8和PS11,且均為裂解性噬菌體。經(jīng)透射電鏡觀察,噬菌體PS5頭長約74.1 nm,寬約74.1nm,屬于無尾結(jié)構(gòu)的二十面體;噬菌體PS8頭長約70.3 nm,寬約70.3 nm,屬于無尾結(jié)構(gòu)的二十面體;噬菌體PS11頭長約92.6 nm,寬約92.6 nm,屬于無尾結(jié)構(gòu)的二十面體。2.噬菌體宿主譜測定通過對噬菌體PS5、PS8、PS11進(jìn)行交叉宿主感染實驗,測定噬菌體的宿主譜。實驗結(jié)果顯示:噬菌體PS5、PS8只能感染各自的宿主菌,而PS11不僅能感染宿主菌S11,還能感染沙門氏菌S8,是一株寬宿主譜噬菌體。3.噬菌體PS11溫度和PH穩(wěn)定性測定通過設(shè)置不同的溫度:30、40、50、60、70、80℃和不同的PH:3、4、5、6、7、8、9、10、11分別處理噬菌體PS11原液60 min,測定處理后PS11的感染效價。實驗結(jié)果顯示:噬菌體PS11的適宜溫度范圍為30-50℃,適宜PH范圍為7-9。4.噬菌體PS11最佳感染復(fù)數(shù)測定通過設(shè)置噬菌體PS11感染沙門氏菌S11的不同感染復(fù)數(shù):0.01、0.1、1、10、100,測定感染后PS11的效價。實驗結(jié)果顯示:噬菌體PS11對沙門氏菌S11的最佳感染復(fù)數(shù)為0.1。5.噬菌體PS11一步繁殖曲線測定通過定時取樣測定噬菌體PS11感染沙門氏菌S11的效價,繪制出PS11對S11的一步繁殖曲線。實驗結(jié)果顯示:噬菌體PS11的潛伏期約為20 min,裂解期約在20-95min,吸附率為61.4%,平均裂解量為450。6.噬菌體PS11 4℃保存效價衰減規(guī)律測定將噬菌體PS11以菌懸液形式4℃保存,每隔10天測定一次效價,直到檢測不到效價。實驗結(jié)果顯示:噬菌體PS11菌懸液4℃保存能夠保持活性達(dá)70天以上,80天內(nèi)仍然具有活性。7.噬菌體PS11抑菌活性測定通過濁度法測定噬菌體PS11與沙門氏菌S11混合液吸光度OD600nm值的變化。實驗結(jié)果顯示:PS11在初始5 h內(nèi)抑菌效果十分明顯,5 h后,抑制作用減弱,S11濁度上升,但仍低于空白組濁度。8.不同時長、不同效價噬菌體PS11處理沙門氏菌S11不同稀釋度的噬菌體PS11液:102、103、104、105、106分別處理沙門氏菌S11 1h、2 h、3 h后,測定沙門氏菌S11的濃度。實驗結(jié)果顯示:噬菌體效價相同時,沙門氏菌S11數(shù)量隨著處理時間增加而下降,且降低98%左右后保持平衡;處理時間相同時,沙門氏菌數(shù)隨著噬菌體效價增加而下降,且在降低98%左右保持穩(wěn)定。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2376677