【摘要】：為獲得牛源麥?zhǔn)匣【亟M堿性絲氨酸蛋白酶(ASP),筆者擴(kuò)增并構(gòu)建了以麥?zhǔn)匣【鶩D39-1的ASP基因?yàn)椴迦肫蔚闹亟M表達(dá)質(zhì)粒p ET32a-ASP,將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Rosetta中誘導(dǎo)表達(dá)并純化,采用SDS-PAGE與Western-blot技術(shù)檢測(cè)目的蛋白是否表達(dá)成功。結(jié)果顯示,擴(kuò)增的ASP基因與GenBank中相應(yīng)基因序列(Kp126900.1)的同源性達(dá)100%。ASP基因在大腸桿菌中成功表達(dá),表達(dá)蛋白相對(duì)分子質(zhì)量大小約為58 ku,與預(yù)期一致。Western-blot顯示在預(yù)期位置出現(xiàn)陽(yáng)性條帶。本研究為麥?zhǔn)匣【鶤SP的生物學(xué)特性與亞單位疫苗的制備奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain recombinant alkaline serine protease (ASP), of Vibrio vibrio from cattle, the recombinant expression plasmid p ET32a-ASP, was constructed with the ASP base of FD39-1 as the inserted fragment. The plasmid was transformed into Escherichia coli Rosetta for expression and purification. SDS-PAGE and Western-blot techniques were used to detect the expression of the target protein. The results showed that the homology between the amplified ASP gene and the corresponding gene sequence (Kp126900.1) in GenBank was similar to that of 100%.ASP gene expressed in E. coli, and the relative molecular weight of the expressed protein was about 58 ku,. As expected. Western-blot shows positive bands in the expected position. This study laid a foundation for the biological characteristics of ASP and the preparation of subunit vaccine.
【作者單位】： 西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系;重慶市獸醫(yī)科學(xué)工程研究中心;
【基金】：“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAD36B00) 重慶市重點(diǎn)科技攻關(guān)資助項(xiàng)目(cstc2012jcsfjfzhX0021) 重慶高校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)計(jì)劃(CXTDG201602003)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

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