發(fā)布時(shí)間：2018-12-07 10:38

【摘要】：雞球蟲病是由雞球蟲寄生于雞的小腸及盲腸上皮細(xì)胞內(nèi)引起的寄生性原蟲病,對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前,防控雞球蟲病的主要措施包括藥物預(yù)防以及活疫苗的使用,其中,活疫苗包括強(qiáng)毒疫苗和弱毒疫苗。但是,藥物的大量使用容易導(dǎo)致環(huán)境污染和藥物殘留,對(duì)環(huán)境和人的健康造成危害。強(qiáng)毒苗使用不當(dāng)能夠在雞群中引起雞球蟲病的爆發(fā),而弱毒苗的生產(chǎn)成本較高。這使得對(duì)雞球蟲病的防控不能達(dá)到理想的效果。研發(fā)高效廉價(jià)的新型疫苗已成為防控球蟲病的重要措施之一�；钶d體疫苗兼有弱毒疫苗的免疫效力高、滅活疫苗的安全性好等優(yōu)點(diǎn),并且使用時(shí)不需要添加佐劑,可同時(shí)構(gòu)建多價(jià)苗,成本低,為雞球蟲病的防控提供了新的選擇。選擇免疫原性較好的抗原是構(gòu)建活載體疫苗的關(guān)鍵。通過對(duì)雞球蟲生活史的研究發(fā)現(xiàn),微線在蟲體粘附和侵入宿主細(xì)胞的過程中發(fā)揮重要作用。微線是頂體復(fù)合器的重要組成部分,位于子孢子和裂殖子前端,在蟲體入侵宿主細(xì)胞的過程中發(fā)揮重要作用。多種微線蛋白已被證明具有良好的免疫原性。柔嫩艾美耳球蟲微線蛋白3(EtMIC3)和頂膜抗原1(EtAMA1)是兩種重要的微線蛋白。對(duì)EtMIC3和EtAMA1蛋白氨基酸序列進(jìn)行分析后,本研究選擇抗原性較好的EtMIC3蛋白的部分片段及EtAMA1蛋白的胞外區(qū)作為候選疫苗抗原。根據(jù)GenBank中公布的核苷酸序列,設(shè)計(jì)EtMIC3和Et AMA1序列的特異性引物,對(duì)基因克隆后進(jìn)行序列測(cè)序,并與已公布的序列進(jìn)行比對(duì)分析,結(jié)果表明,這兩個(gè)基因分別發(fā)生了2個(gè)和5個(gè)突變。將EtAMA1片段克隆至原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白。用蛋白免疫小鼠制備EtAMA1多克隆抗體。分別將EtMIC3和EtAMA1基因片段克隆至沙門氏菌表達(dá)載體pYA3342,鑒定篩選陽性重組質(zhì)粒pYA3342-EtMIC3和pYA3342-EtAMA1,并將陽性重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化至減毒沙門氏菌疫苗菌株X4550內(nèi)。對(duì)陽性重組菌在體外的表達(dá)進(jìn)行了鑒定,western blot結(jié)果顯示,重組沙門氏菌X4550(pYA3342-EtMIC3)和X4550(pYA3342-EtAMA1)能夠在體外分別表達(dá)EtMIC3和EtAMA1。預(yù)實(shí)驗(yàn)中,對(duì)重組疫苗菌株的安全性以及在體內(nèi)的存活時(shí)間進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果顯示,該重組疫苗菌株不會(huì)引起免疫雞的臨床癥狀,在體內(nèi)的存活時(shí)間大約為20天。利用雞球蟲感染試驗(yàn)對(duì)這兩個(gè)重組疫苗株的免疫保護(hù)效果進(jìn)行了探究。120只四日齡雛雞隨機(jī)平均分成6組,I、II組為PBS對(duì)照組,III、IV、V組分別口服免疫空載體疫苗、表達(dá)EtMIC3抗原疫苗和表達(dá)EtAMA1抗原疫苗。VI組混合免疫表達(dá)EtMIC3抗原的疫苗和表達(dá)EtAMA1抗原的疫苗,免疫劑量為109CFU。25日齡時(shí),對(duì)II、III、IV、V、VI組口服接種12000個(gè)E.tenella孢子化卵囊。35日齡時(shí),對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。通過對(duì)比各組之間的體重增長(zhǎng)、相對(duì)增重率、卵囊排出量、卵囊減少率、盲腸病變計(jì)分對(duì)疫苗的免疫保護(hù)效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,免疫表達(dá)EtMIC3抗原的疫苗組、免疫表達(dá)EtAMA1抗原的疫苗組和混合免疫組在攻蟲第七天時(shí),相對(duì)增重率分別為80.49%、75.21%和87.82%;卵囊減少率分別為61.9%、46.03%和63.49%;盲腸病變記分分別為2.0、2.3和1.7。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明,攜帶球蟲抗原的減毒沙門氏菌活載體疫苗株能夠?qū)η蛳x的感染提供一定的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.31

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李艷琴;王振海;秦建華;李潭清;;雞球蟲病免疫防治研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年13期

2 郁川;程相朝;趙戰(zhàn)勤;張春杰;李銀聚;吳庭才;;豬霍亂沙門氏菌C78-1株Δcrp缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性初步研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2010年05期

3 杜愛芳;王素華;胡松華;;減毒沙門氏菌為載體傳遞雞球蟲DNA疫苗的安全性、穩(wěn)定性與免疫原性[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2006年02期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 仇保豐;雞柔嫩艾美耳球蟲SO7基因免疫調(diào)節(jié)型核酸疫苗的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

，

本文編號(hào)：2367069