【摘要】：天然免疫系統(tǒng)是機體抵御外來微生物入侵的第一道防線。自然殺傷(NK)細胞是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分,是一類重要的免疫調(diào)節(jié)和效應細胞,是機體抗御感染和防止細胞惡性轉(zhuǎn)化的重要免疫調(diào)節(jié)細胞,在機體抗感染、腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、免疫監(jiān)視和造血調(diào)控等方面發(fā)揮著重要作用。因而,NK細胞越來越引起人們的關(guān)注,成為免疫治療研究領(lǐng)域的熱點。NK細胞在免疫應答過程中發(fā)揮的調(diào)節(jié)功能,有賴于抗原提呈細胞所產(chǎn)生的細胞因子和趨化因子。其中IL-12是關(guān)鍵的NK細胞活化因子,IL-12源自樹突狀細胞、巨噬細胞和B細胞,是一種多功能細胞因子。IL-12自被發(fā)現(xiàn)起,就因其對NK細胞、T細胞的激活作用,而受到廣泛關(guān)注。IL-12是維持NK細胞生長和活性的重要細胞因子,不僅誘導NK細胞分泌IFN-γ,還能促進NK細胞增殖從而介導細胞毒作用,在天然免疫和適應性免疫都發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。NK細胞的活性可以反應機體細胞免疫應答的強弱,NK細胞已被廣泛的應用于各種疾病的免疫細胞治療,有良好的應用前景。但是,在抗腫瘤治療中發(fā)現(xiàn),IL-12連續(xù)注射會引起機體對IL-12的反應性減弱和治療效果減弱等表現(xiàn),而相應的分子機制還有待進一步的研究。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),IL-12持續(xù)體外刺激人的NK細胞,通過誘導ROS累積促進NK細胞凋亡,或者通過誘導microRNA自反饋性地抑制IL-12信號通路的活化,引起人NK細胞對連續(xù)IL-12刺激的低反應性,導致IFN-γ分泌量逐漸減少。在本研究中,我們擬在細胞水平和動物整體水平,檢測連續(xù)rmIL-12刺激對正常小鼠NK細胞活性的影響。研究工作取得如下結(jié)果:1.不同濃度rmIL-12體外刺激脾臟淋巴細胞不同時間,檢測脾臟淋巴細胞產(chǎn)生IFN-γ的水平,結(jié)果顯示,無論是在IL-2存在條件下,還是IL-15存在條件下,1 ng/ml的rmIL-12均能夠顯著誘導脾臟淋巴細胞分泌IFN-γ,提示1 ng/ml可以作為rmIL-12的有效工作濃度運用于后續(xù)試驗研究。1ng/ml的rmIL-12誘導的IFN-γ分泌量在16 h增量達到最大值,隨后每8h都有不同程度的減少。2.不同濃度rmIL-12體外刺激脾臟淋巴細胞24h和48h,IFN-γ分泌量隨著刺激濃度增高而增加(P0.05),隨后再給予1ng/ml的rmIL-12二次刺激12h,與未給予rmIL-12首次刺激的細胞相比,IFN-γ分泌量沒有顯著差異。3.小鼠脾臟淋巴細胞與rmIL-12和兩種不同Toll樣受體激動劑分別孵育后,分別進行rmIL-12和兩種不同Toll樣受體激動劑的二次刺激。結(jié)果顯示,連續(xù)rmIL-12體外刺激小鼠脾臟淋巴細胞對Toll樣受體激動劑聯(lián)合刺激誘導的IFN-γ產(chǎn)生沒有顯著影響。4.rmIL-12刺激小鼠脾臟淋巴細胞24h和48h,再給予1 ng/ml的rmIL-12二次刺激。結(jié)果顯示,連續(xù)IL-12體外刺激小鼠脾臟淋巴細胞引起NK細胞在脾臟淋巴細胞中的比例顯著下降(P0.05),NK細胞產(chǎn)生IFN-γ的能力輕度下降。5.6~8周齡健康野生型雌性C57BL/6小鼠隨機分為空白對照組和實驗組,各組予以相應處理,測定連續(xù)rmIL-12刺激對免疫系統(tǒng)發(fā)育成熟的小鼠脾臟淋巴細胞中NK細胞數(shù)目和比例、NK細胞亞型分布、NK細胞凋亡率及NK細胞活性(IFN-γ產(chǎn)生能力、CD69表達、顆粒酶B表達和殺傷活性)的影響。檢測結(jié)果表明,持續(xù)rmIL-12作用雖然增加CD69陽性NK細胞比例(P0.01),但是,明顯減少NK細胞比例和數(shù)量(P0.05),輕度誘導NK細胞凋亡(P0.05),降低NK細胞產(chǎn)生IFN-γ的能力(P0.05),下調(diào)顆粒酶B的表達及NK細胞的殺傷活性(P0.05)。上述研究結(jié)果表明,連續(xù)IL-12體外刺激,對小鼠脾臟淋巴細胞IFN-γ產(chǎn)生能力沒有顯著影響;但引起NK細胞在脾臟淋巴細胞中的比例顯著下降,NK細胞產(chǎn)生IFN-γ的能力輕度下調(diào)。連續(xù)的rmIL-12體內(nèi)刺激,能夠誘導體內(nèi)NK細胞數(shù)量減少,分泌細胞因子能力下降、殺傷力減弱、免疫反應性減弱。
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【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.3

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1 王莉莉;Interleukin-12對小鼠NK細胞的調(diào)控作用及機制[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

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本文編號：2361484