發(fā)布時(shí)間：2018-11-27 16:56

【摘要】：天然免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御外來微生物入侵的第一道防線。自然殺傷(NK)細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分,是一類重要的免疫調(diào)節(jié)和效應(yīng)細(xì)胞,是機(jī)體抗御感染和防止細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,在機(jī)體抗感染、腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、免疫監(jiān)視和造血調(diào)控等方面發(fā)揮著重要作用。因而,NK細(xì)胞越來越引起人們的關(guān)注,成為免疫治療研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。NK細(xì)胞在免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮的調(diào)節(jié)功能,有賴于抗原提呈細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞因子和趨化因子。其中IL-12是關(guān)鍵的NK細(xì)胞活化因子,IL-12源自樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞,是一種多功能細(xì)胞因子。IL-12自被發(fā)現(xiàn)起,就因其對(duì)NK細(xì)胞、T細(xì)胞的激活作用,而受到廣泛關(guān)注。IL-12是維持NK細(xì)胞生長和活性的重要細(xì)胞因子,不僅誘導(dǎo)NK細(xì)胞分泌IFN-γ,還能促進(jìn)NK細(xì)胞增殖從而介導(dǎo)細(xì)胞毒作用,在天然免疫和適應(yīng)性免疫都發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。NK細(xì)胞的活性可以反應(yīng)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱,NK細(xì)胞已被廣泛的應(yīng)用于各種疾病的免疫細(xì)胞治療,有良好的應(yīng)用前景。但是,在抗腫瘤治療中發(fā)現(xiàn),IL-12連續(xù)注射會(huì)引起機(jī)體對(duì)IL-12的反應(yīng)性減弱和治療效果減弱等表現(xiàn),而相應(yīng)的分子機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),IL-12持續(xù)體外刺激人的NK細(xì)胞,通過誘導(dǎo)ROS累積促進(jìn)NK細(xì)胞凋亡,或者通過誘導(dǎo)microRNA自反饋性地抑制IL-12信號(hào)通路的活化,引起人NK細(xì)胞對(duì)連續(xù)IL-12刺激的低反應(yīng)性,導(dǎo)致IFN-γ分泌量逐漸減少。在本研究中,我們擬在細(xì)胞水平和動(dòng)物整體水平,檢測連續(xù)rmIL-12刺激對(duì)正常小鼠NK細(xì)胞活性的影響。研究工作取得如下結(jié)果:1.不同濃度rmIL-12體外刺激脾臟淋巴細(xì)胞不同時(shí)間,檢測脾臟淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的水平,結(jié)果顯示,無論是在IL-2存在條件下,還是IL-15存在條件下,1 ng/ml的rmIL-12均能夠顯著誘導(dǎo)脾臟淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ,提示1 ng/ml可以作為rmIL-12的有效工作濃度運(yùn)用于后續(xù)試驗(yàn)研究。1ng/ml的rmIL-12誘導(dǎo)的IFN-γ分泌量在16 h增量達(dá)到最大值,隨后每8h都有不同程度的減少。2.不同濃度rmIL-12體外刺激脾臟淋巴細(xì)胞24h和48h,IFN-γ分泌量隨著刺激濃度增高而增加(P0.05),隨后再給予1ng/ml的rmIL-12二次刺激12h,與未給予rmIL-12首次刺激的細(xì)胞相比,IFN-γ分泌量沒有顯著差異。3.小鼠脾臟淋巴細(xì)胞與rmIL-12和兩種不同Toll樣受體激動(dòng)劑分別孵育后,分別進(jìn)行rmIL-12和兩種不同Toll樣受體激動(dòng)劑的二次刺激。結(jié)果顯示,連續(xù)rmIL-12體外刺激小鼠脾臟淋巴細(xì)胞對(duì)Toll樣受體激動(dòng)劑聯(lián)合刺激誘導(dǎo)的IFN-γ產(chǎn)生沒有顯著影響。4.rmIL-12刺激小鼠脾臟淋巴細(xì)胞24h和48h,再給予1 ng/ml的rmIL-12二次刺激。結(jié)果顯示,連續(xù)IL-12體外刺激小鼠脾臟淋巴細(xì)胞引起NK細(xì)胞在脾臟淋巴細(xì)胞中的比例顯著下降(P0.05),NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的能力輕度下降。5.6~8周齡健康野生型雌性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,各組予以相應(yīng)處理,測定連續(xù)rmIL-12刺激對(duì)免疫系統(tǒng)發(fā)育成熟的小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中NK細(xì)胞數(shù)目和比例、NK細(xì)胞亞型分布、NK細(xì)胞凋亡率及NK細(xì)胞活性(IFN-γ產(chǎn)生能力、CD69表達(dá)、顆粒酶B表達(dá)和殺傷活性)的影響。檢測結(jié)果表明,持續(xù)rmIL-12作用雖然增加CD69陽性NK細(xì)胞比例(P0.01),但是,明顯減少NK細(xì)胞比例和數(shù)量(P0.05),輕度誘導(dǎo)NK細(xì)胞凋亡(P0.05),降低NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的能力(P0.05),下調(diào)顆粒酶B的表達(dá)及NK細(xì)胞的殺傷活性(P0.05)。上述研究結(jié)果表明,連續(xù)IL-12體外刺激,對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞IFN-γ產(chǎn)生能力沒有顯著影響;但引起NK細(xì)胞在脾臟淋巴細(xì)胞中的比例顯著下降,NK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的能力輕度下調(diào)。連續(xù)的rmIL-12體內(nèi)刺激,能夠誘導(dǎo)體內(nèi)NK細(xì)胞數(shù)量減少,分泌細(xì)胞因子能力下降、殺傷力減弱、免疫反應(yīng)性減弱。
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【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.3

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1 王莉莉;Interleukin-12對(duì)小鼠NK細(xì)胞的調(diào)控作用及機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2361484