【摘要】：動(dòng)物食品是人類飲食中常見且是最重要的一類食物。這類食物的原料是各種動(dòng)物身上可食用的肉和組織,經(jīng)過不同方法不同程度的加工,成為各種各樣的肉類食品。常見的肉類包括豬肉、牛肉、魚肉等。這些肉類食品營(yíng)養(yǎng)豐富,吸收率高,滋味鮮美,可提供人體所必需的氮基酸、無機(jī)鹽、脂肪酸和維生素等物質(zhì)。近年來人們對(duì)于肉類食品的需求在不斷增加,價(jià)格也隨之持續(xù)增長(zhǎng)。但是,魚類在生長(zhǎng)過程中易受到細(xì)菌侵襲,水產(chǎn)養(yǎng)殖戶使用孔雀石綠治理寄生蟲、真菌或細(xì)菌感染。畜類的生長(zhǎng)周期較長(zhǎng),瘦肉率不高。部分養(yǎng)殖專業(yè)戶就使用玉米赤霉醇、β-受體激動(dòng)劑等藥物,以此來提高瘦肉率,減少脂肪含量,縮短出欄時(shí)間。這些藥物通常被添加在飼料中,或者是以耳根埋植的形式用到畜類身上,易造成獸藥物殘留。孔雀石綠特別是其代謝產(chǎn)物在水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)有明顯的高殘留及高毒性,可產(chǎn)生三致(致畸、致癌和致突變)等副作用;玉米赤霉醇?xì)埩粼隗w內(nèi)會(huì)引起人體性激素功能紊亂及影響第二性征的正常發(fā)育,在外部因素誘導(dǎo)下,可能會(huì)導(dǎo)致癌癥的發(fā)生。玉米赤霉醇排出動(dòng)物體外后,還可經(jīng)飲水和食物造成二次污染及環(huán)境污染;β-受體激動(dòng)劑以超過治療劑量5-10倍的用量用于家畜飼養(yǎng)時(shí),易在動(dòng)物臟器中積聚殘留,并通過食物鏈進(jìn)入人體,攝入過量會(huì)導(dǎo)致心悸、頭疼、惡心,甚至損害肝腎。為了保護(hù)消費(fèi)者的健康,中國(guó)、歐盟等國(guó)家都禁止使用這些獸藥。人們?cè)u(píng)價(jià)獸藥已經(jīng)不再局限于它對(duì)肉類食品在經(jīng)濟(jì)上帶來的效益,而更注重于它無損害環(huán)境和健康的社會(huì)效益。因此,肉類食品中獸藥殘留的檢測(cè)有著極其重要的意義�，F(xiàn)在用于獸藥檢測(cè)的方法有HPLC,MS/MS-HPLC,ELISA等,但是這些方法都有一定的不足(例如不能大規(guī)模篩選檢測(cè),成本高等)。由此,多種類獸藥的檢測(cè)、低檢測(cè)限、大規(guī)模篩選檢測(cè)成了發(fā)展的需求,這不僅可以保障肉類食品的質(zhì)量安全,還可以減少人力、財(cái)力、物力的大量損耗等。在本文中,建立了一種高效,快速且靈敏的篩選檢測(cè)方法,用于動(dòng)物食品中獸藥的殘留檢測(cè)1。第一部分水產(chǎn)品中孔雀石綠Alpha LISA檢測(cè)方法的建立目的:建立孔雀石綠(Malachite green,MG)的光激化學(xué)發(fā)光納米均相時(shí)間分辨熒光免疫法(Alpha LISA)分析方法。方法:將待測(cè)物,生物素化-MG-BSA,抗體加入到孔板中,再加入供體微珠和受體微珠,用Alpha LISA儀檢測(cè)。結(jié)果:結(jié)果表明該方法特異性良好,與無色孔雀石綠,無色結(jié)晶紫無交叉反應(yīng),靈敏度為0.42 ng/m L,MG在兩種魚樣品中的回收率在81.0%~105.0%和84.0%~90.8%之間,批內(nèi)RSD9.5%,批間RSD16.0%。結(jié)論:MG Alpha LISA方法可以簡(jiǎn)單、快速的對(duì)魚類進(jìn)行MG測(cè)定,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定等特點(diǎn)。第二部分Alpha LISA法檢測(cè)肌肉組織中玉米赤霉醇和玉米赤霉烯酮目的:采用均相光致化學(xué)發(fā)光免疫分析法(Alpha LISA)檢測(cè)肌肉組織樣品中玉米赤霉醇和玉米赤霉烯酮。方法:以豬肉和牛肉為原料,樣品經(jīng)過乙酸鈉、β-葡萄糖苷酸/硫酸酯復(fù)合酶提取,HLB柱凈化,采用Alpha LISA法檢測(cè)。結(jié)果:該方法顯示出在0.01-4ng/m L范圍內(nèi)有一個(gè)良好的線性關(guān)系(R20.99),靈敏度為0.066ng/m L。玉米赤霉醇的交叉反應(yīng)率為100%,玉米赤霉酮交叉反應(yīng)率為82.1%,和其它化合物的交叉反應(yīng)率小于40%。在1-4ng/m L添加水平下,玉米赤霉醇豬肉和牛肉的平均回收率分別為96.3%?105.0%,91.7%~100.5%,RSD17.5%。結(jié)論:結(jié)果表明,該方法適用于肌肉組織中玉米赤霉醇和玉米赤霉酮的殘留檢測(cè)。第三部分豬肉中β-受體激動(dòng)劑(克倫特羅,沙丁胺醇,溴布特羅,特布他林)Alpha LISA檢測(cè)方法的建立目的:建立了快速檢測(cè)豬肉中克倫特羅、沙丁胺醇、溴布特羅和特布他林4種β-受體激動(dòng)劑的光激化學(xué)發(fā)光納米均相時(shí)間分辨熒光免疫(Alpha LISA)分析方法。方法:以豬肉為原料,樣品經(jīng)乙酸銨和β-葡萄糖醛酸酶/硫酸酯酶酶解提取過柱,濃縮至干后,用緩沖溶液定容。樣品與生物素化抗原、抗體、供體微珠和受體微珠進(jìn)行酶聯(lián)免疫,Alpha LISA進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:沙丁胺醇、克倫特羅、溴布特羅和特布他林在0.1~500 ng/m L范圍內(nèi)呈良好線性,R2均0.98,沙丁胺醇與克倫特羅、溴布特羅和特布他林的交叉反應(yīng)率分別為143.3%,179.2%和95.6%,靈敏度范圍為0.03~0.08 ng/m L。在0.5,10,20μg/kg 3個(gè)添加水平下,4種化合物的平均回收率為82.5%~115.9%,RSD12.0%。結(jié)論:該方法操作簡(jiǎn)單,快速準(zhǔn)確,適用于豬肉中β-受體激動(dòng)劑的篩選與檢測(cè)。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S859.84

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2345210