【摘要】：在現(xiàn)代奶牛群體改良中，，種公牛是影響奶牛群體遺傳品質(zhì)的主要因素，其對(duì)奶牛群體遺傳進(jìn)展的貢獻(xiàn)率高達(dá)70%以上。精液品質(zhì)性狀是種公牛選育工作中最基本的一項(xiàng)衡量指標(biāo)，受到多基因控制，而常規(guī)育種手段選育良種公牛效率低，因此結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，篩選出影響種公牛精液品質(zhì)的候選基因作為分子標(biāo)記，通過分子標(biāo)記輔助選擇育種，為未來定向選育高品質(zhì)精液的種公牛提供參考。 粘著斑激酶(Focal adhesion kinase, FAK)是一類胞質(zhì)非受體蛋白酪氨酸激酶（PTKs），它在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，它是胞內(nèi)外信號(hào)出入的中樞，介導(dǎo)多條信號(hào)通路。FAK還參與精子的釋放和精子的獲能等過程，在機(jī)體睪丸中具有較高的表達(dá)量，據(jù)此推測(cè)FAK基因可能是影響種公牛精液品質(zhì)的一個(gè)候選基因。因此本課題以218頭中國(guó)荷斯坦種公牛精液為樣本，通過PCR和DNA測(cè)序技術(shù)篩選FAK基因的5'側(cè)翼區(qū)和3'UTR區(qū)中的突變位點(diǎn)，運(yùn)用SAS軟件統(tǒng)計(jì)分析這些突變位點(diǎn)與公牛精液品質(zhì)的關(guān)系，通過實(shí)驗(yàn)最終鑒定出功能性的突變位點(diǎn)。 1、中國(guó)荷斯坦公牛FAK基因3'UTR SNP的鑒定及其與精液品質(zhì)的關(guān)聯(lián)性分析 本實(shí)驗(yàn)通過PCR和DNA測(cè)序技術(shù)對(duì)FAK基因的3'UTR區(qū)進(jìn)行了SNPs位點(diǎn)的掃描，發(fā)現(xiàn)了1個(gè)SNP，即g.129462_129463insGAA。對(duì)該g.129462_129463insgaa SNP位點(diǎn)與種公牛精液品質(zhì)關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，野生基因型BB種公牛個(gè)體的射精量和鮮精密度顯著高于AA基因型種公牛。 2、3'UTR SNP g.129462_129463insGAA對(duì)bta-miR-21調(diào)控FAK基因表達(dá)的影響 利用miRNA在線軟件預(yù)測(cè)與FAK基因3'UTR區(qū)域結(jié)合的miRNAs。結(jié)果表明FAK基因3'UTR上的突變位點(diǎn)g.129462_129463insGAA位于bta-miR-21的種子序列區(qū)，而且發(fā)現(xiàn)此SNP突變前后影響FAK基因和bta-miR-21的結(jié)合能力。為了更好的驗(yàn)證分子標(biāo)記g.129462_129463insGAA對(duì)bta-miR-21與FAK基因3'UTR片段結(jié)合能力的影響，利用細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)對(duì)上述預(yù)測(cè)結(jié)果進(jìn)行了驗(yàn)證。分別將含有突變型和野生型兩種基因型的FAK基因3'UTR片段連入pMIR-ReportTM Luciferase報(bào)告載體中，與bta-miR-21真核表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染MLTC-1細(xì)胞，通過雙熒光素報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與pMIR-REPORTLuciferase-FAK野生型重組質(zhì)粒相比， bta-miR-21質(zhì)粒與pMIR-REPORTLuciferase-FAK突變后的重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染可使細(xì)胞的熒光素酶活性下降。通過Q-PCR檢測(cè)g.129462_129463insGAA位點(diǎn)不同基因型個(gè)體中FAK mRNA的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BB基因型個(gè)體中FAK mRNA的含量極顯著（P0.01）高于AB基因型。上述的關(guān)聯(lián)分析也表明，BB基因型個(gè)體的射精量和鮮精密度顯著高于AA型種公牛，因此我們推測(cè)此SNP可能通過影響bta-miR-21與FAK基因3'UTR的結(jié)合能力，影響FAK基因的表達(dá)量，從而影響精子的釋放。 3、中國(guó)荷斯坦公牛FAK基因的啟動(dòng)子區(qū)SNP與精液品質(zhì)的關(guān)聯(lián)性分析 啟動(dòng)子作為基因必不可少的元件，可以影響基因轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)和表達(dá)的強(qiáng)度。本研究利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)FAK基因的啟動(dòng)子區(qū)，發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子區(qū)一些序列可與各種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，包括NFATC1，STAT1，STAT3，F(xiàn)OXP1，SOX18，SP1等，這些位點(diǎn)的存在可能涉及FAK基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增該預(yù)測(cè)的啟動(dòng)子區(qū)，測(cè)序發(fā)現(xiàn)在該預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)的靠近起始密碼子處發(fā)現(xiàn)一個(gè)g.-58CT突變。通過測(cè)序分型及關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，該SNPs位點(diǎn)中，對(duì)種公牛個(gè)體的鮮精活力來說，CC基因型個(gè)體值顯著低于TT基因型個(gè)體值（P＜0.05）。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S823

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 周國(guó)權(quán);徐敬哲;趙高俊;高磊;馬欣;秦懇;錢漢超;;影響種公牛精液品質(zhì)的因素[J];現(xiàn)代畜牧獸醫(yī);2012年04期

2 秦立紅;任穎;劉暢;張金玉;張嘉保;趙志輝;;牛AR基因5′UTR SNP分析及與精液品質(zhì)關(guān)系[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年03期

3 張勝利;石萬海;;北美種公牛選育與后裔測(cè)定方法簡(jiǎn)介[J];中國(guó)奶牛;2007年S1期

4 毛永江,鐘光輝,鄭玉才,彭先文,楊章平,王永,江明峰;中國(guó)牦牛乳蛋白遺傳多態(tài)性及其與泌乳性能相關(guān)性研究[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2004年02期

5 李建斌;韓波;張?jiān)?王玲玲;侯明海;仲躋峰;張沅;;影響荷斯坦種公牛精液生產(chǎn)性狀的環(huán)境因素分析[J];中國(guó)畜牧雜志;2012年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 任竹青;大白×梅山豬雜交組合親子代間脂肪組織差異表達(dá)基因的分離和功能初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2344534