發(fā)布時(shí)間：2018-11-20 04:53

【摘要】：新城疫(Newcastle Disease,ND)是由副粘病毒科、禽腮腺炎病毒屬中的新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起禽類的一種高度接觸性、烈性傳染病。過去認(rèn)為水禽對(duì)NDV具有較強(qiáng)抵抗力,但自1997年以來,我國出現(xiàn)了NDV在鵝群中的爆發(fā),對(duì)水禽養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的損失。后來,研究證實(shí)基因Ⅶd亞型NDV是造成鵝群感染發(fā)病的主要病原。這表明與早期經(jīng)典的NDV強(qiáng)毒相比,基因Ⅶd亞型NDV可以跨越宿主屏障感染水禽,并顯示較強(qiáng)的致病力。但是,NDV致病機(jī)制的研究大多集中于雞,而對(duì)水禽致病機(jī)理的研究較為缺乏。此外,基因Ⅶd亞型NDV相對(duì)早期基因型NDV強(qiáng)毒對(duì)水禽顯示較強(qiáng)致病性的機(jī)制也不明確。本團(tuán)隊(duì)前期研究已經(jīng)證實(shí),病毒的M、F、HN基因?qū)颌鱠亞型NDV對(duì)雞的致病性及誘發(fā)免疫系統(tǒng)的免疫病理損傷具有決定作用。本研究選擇早期基因型(Ⅳ)NDVHerts/33株、晚期基因型(Ⅶ)NDVJS5/05株以及Herts/33、JS5/05互換M+F+HN的兩株重組病毒,通過體外實(shí)驗(yàn)比較病毒的毒力、合胞能力、在鵝淋巴細(xì)胞中誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、細(xì)胞因子應(yīng)答和炎性介質(zhì)水平以及病毒對(duì)鵝的致病特性等指標(biāo),初步探討基因Ⅶd亞型NDV對(duì)鵝具有高致病力的潛在機(jī)制。1.基因Ⅶd亞型與基因Ⅳ型NDV體外致病性比較本研究選用基因Ⅶd亞型NDV毒株JS5/05、基因Ⅳ型NDV毒株Herts/33以及Herts/33、JS5/05互換M+F+HN的兩株重組病毒(JS-MFHNH和Her-MFHNJ)作為模式病毒。首先,測定了四株病毒的體外生物學(xué)特性與毒力指標(biāo)(ICPI),結(jié)果表明四株病毒滴度(HA、EID50、TCIDs0)相近且均為典型的強(qiáng)毒。其次,在鵝胚成纖維細(xì)胞(goose embryo fibroblasts,GEF)和鵝脾淋巴細(xì)胞上進(jìn)行了體外致病性實(shí)驗(yàn),檢測了各模式病毒在GEF上的復(fù)制能力和合胞能力以及在淋巴細(xì)胞上的生長曲線、細(xì)胞凋亡和炎性介質(zhì)水平等指標(biāo)。結(jié)果表明,各毒株在GEF上的生長復(fù)制能力相近,但是病毒在淋巴細(xì)胞上的復(fù)制水平存在明顯差異。表達(dá)JS5/05 M+F+HN的重組病毒Her-MFHNJ的復(fù)制水平比其母本病毒Herts/33上升約10倍;表達(dá)Herts/33 M+F+HN的重組病毒JS-MFHNH的滴度比其母本病毒JS5/05下降約3倍。此外,JS-MFHNH誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡的比例低于JS5/05;Her-MFHNJ誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞比例顯著高于Herts/33,且可以顯著上調(diào)淋巴細(xì)胞中炎性介質(zhì)(一氧化氮和活性氧)的水平,與基因供體JS5/05相近。以上結(jié)果說明,基因Ⅶd亞型毒株JS5/05、基因Ⅳ型毒株Herts/33以及兩株重組病毒在毒力、病毒滴度、GEF上的復(fù)制能力等特性上無顯著差異,但是JS5/05與Her-MFHNJ在鵝淋巴細(xì)胞上的復(fù)制水平、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和炎性介質(zhì)產(chǎn)生的能力高于Herts/33與JS-MFHNH,說明基因Ⅶd亞型NDV在淋巴細(xì)胞上更高復(fù)制水平及其誘導(dǎo)的高水平的細(xì)胞凋亡以及炎性介質(zhì)可能與病毒對(duì)鵝的高致病性有關(guān)。2.基因Ⅶd亞型與基因Ⅳ型NDV對(duì)鵝的致病性比較本研究選用Herts/33、JS5/05、JS-MFHNH和Her-MFHNJ作為模式病毒對(duì)鵝進(jìn)行體內(nèi)致病性試驗(yàn),比較病毒感染鵝的臨床癥狀和大體病變。結(jié)果顯示,病毒接種劑量為108ELD50時(shí),JS5/05和Her-MFHNJ感染鵝從第3天開始出現(xiàn)癥狀,Herts/33及JS-MFHNH感染鵝從第5天才開始出現(xiàn)癥狀。鵝的主要癥狀均相似,表現(xiàn)為鼻頭粘液、呼吸困難、拉白色稀糞、后期頭頸扭曲、癱瘓倒地不起等。JS5/05和Her-MFHNJ組鵝比Herts/33及JS-MFHNH組的鵝癥狀更嚴(yán)重,但僅有Her-MFHNJ組一只鵝在第7天死亡。病理剖檢顯示,JS5/05和Her-MFHNJ組鵝從第3天出現(xiàn)脾臟、胰臟的壞死點(diǎn),及喉頭、小腸粘膜、脾臟和胸腺出血充血,嚴(yán)重者出現(xiàn)全身組織器官出血和脾臟、胰臟嚴(yán)重壞死。Herts/33及JS-MFHNH感染鵝病變出現(xiàn)時(shí)間較晚,且基本僅表現(xiàn)小腸粘膜和胸腺出血腫大,組織器官壞死病變較輕。組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示,JS5/05與Her-MFHNJ在鵝的脾臟、胸腺、法氏囊等主要免疫器官中可以引起廣泛、嚴(yán)重的細(xì)胞壞死病變。病理學(xué)實(shí)驗(yàn)說明,與早期基因型NDV相比,基因Ⅶd亞型NDV及表達(dá)Ⅶd亞型M+F+HN基因的重組病毒在鵝免疫系統(tǒng)中造成的組織損傷更嚴(yán)重。病毒組織載量測定顯示,JS5/05和Her-MFHNJ鵝免疫器官(脾臟、胸腺、法氏囊)中的病毒載量高于Herts/33及JS-MFHNH。免疫器官中炎性介質(zhì)水平測定結(jié)果表明,Herst/33骨架上表達(dá)JS5/05的M+F+HN,重組病毒相較母本病毒可顯著上調(diào)一氧化氮水平。用qRT-PCR法檢測感染鵝免疫器官中代表性細(xì)胞因子基因的表達(dá),結(jié)果表明Herst/33骨架上表達(dá)JS5/05的M+F+HN基因,重組病毒相較母本病毒可顯著上調(diào)脾臟與胸腺中IL-1β、IL-2、TNF-α、IFN-β、IL-8的表達(dá)水平;與之對(duì)應(yīng)的是,JS5/05骨架上表達(dá)Herts/33的M+F+HN,重組病毒相較母本病毒可顯著下調(diào)IL-1β、IL-2、TNF-α、IFN-β、IL-6、IL-8、IL-18的表達(dá)水平。綜上,這些結(jié)果說明,基因Ⅶd亞型毒株以及表達(dá)Ⅶd亞型M+F+HN的重組病毒在鵝免疫器官中的復(fù)制效率、誘導(dǎo)炎性介質(zhì)水平以及誘導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答水平顯著高于基因Ⅳ型毒株及表達(dá)Ⅳ型M+F+HN的重組病毒,這些特征可能共同造成了基因Ⅶd亞型NDV對(duì)鵝的高致病性。全文小結(jié)1.體外致病性實(shí)驗(yàn)顯示,與基因Ⅳ型NDV相比,基因Ⅶd亞型NDV對(duì)鵝成纖維細(xì)胞的合胞能力、誘導(dǎo)鵝淋巴細(xì)胞凋亡和炎性介質(zhì)產(chǎn)生的能力及在鵝脾淋巴細(xì)胞上的復(fù)制能力更強(qiáng),這些特征與病毒的M、F、HN三基因有關(guān)。2.鵝感染實(shí)驗(yàn)說明,與早期基因Ⅳ型毒株相比,基因Ⅶd亞型病毒對(duì)鵝的致病力更強(qiáng),引起的免疫系統(tǒng)病變更嚴(yán)重,表現(xiàn)為免疫器官的嚴(yán)重壞死病變,這與病毒的高效復(fù)制及其誘導(dǎo)的強(qiáng)烈的炎性反應(yīng)有關(guān),以上這些特性是由病毒的M、F、HN三基因的聯(lián)合作用決定的。3.綜合體外與體內(nèi)感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果,基因Ⅶd亞型NDV在鵝免疫系統(tǒng)中的高效復(fù)制及其誘導(dǎo)的強(qiáng)烈的炎性反應(yīng)共同導(dǎo)致了嚴(yán)重的免疫病理損傷,這與病毒的三個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白基因(M+F+HN)的聯(lián)合作用有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S858.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2343802