【摘要】：為探討豬鏈球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)感染過(guò)程中對(duì)血液紅細(xì)胞(RBC)損害及其機(jī)理,本研究采取無(wú)特定病原微生物感染的豬血液制備RBC懸液,根據(jù)預(yù)試驗(yàn)選用SS2∶RBC感染比(MOI)為100的SS2,分別體外感染RBC 0.5、1、1.5、2 h,光鏡下觀察BRC的形態(tài)變化;用G iem sa染色、CF D A-SE熒光標(biāo)記檢測(cè)SS2對(duì)紅細(xì)胞的黏附和損傷,流式細(xì)胞儀分析不同作用時(shí)間的黏附率,real-time PCR檢測(cè)SS2相關(guān)黏附因子溶菌酶釋放蛋白(MRP)、莢膜多糖(CPS)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)、纖連蛋白和纖維蛋白結(jié)合蛋白(FBPS)及溶血因子溶血素(Sly)的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示,SS2感染后第0.5~1小時(shí),其主要黏附RBC,細(xì)胞呈現(xiàn)棘突樣病變,少量細(xì)胞腫脹,出現(xiàn)輕微溶血,黏附率分別為18.7%和46.3%;感染后第1.5小時(shí),SS2不僅可以黏附RBC,且多數(shù)細(xì)胞溶血,RBC開(kāi)始發(fā)生破裂,黏附率可達(dá)到91.7%;感染后第2小時(shí),細(xì)胞幾乎全部破裂。MRP和CPS2J轉(zhuǎn)錄水平在感染后第0.5~1小時(shí)增高,并與黏附率呈正相關(guān),感染后第2小時(shí)表達(dá)水平下降;Sly轉(zhuǎn)錄水平在感染后第0.5~2小時(shí)持續(xù)增加,與溶血現(xiàn)象呈正相關(guān);GAPDH和FBPS在感染過(guò)程中變化不顯著(P0.05)。結(jié)果表明,SS2感染早期可對(duì)RBC產(chǎn)生黏附和溶血作用,先為黏附作用,后為溶血作用,且作用過(guò)程較快;主要參與黏附因子為MRP和CPS2J,溶血因子為Sly;GAPDH和FBPS是否參與SS2對(duì)RBC的黏附與溶血仍需證實(shí);本試驗(yàn)結(jié)果為研究SS2傳播和致病機(jī)制提供了重要的理論依據(jù)。
[Abstract]:In order to investigate the (RBC) damage of erythrocytes caused by Streptococcus suis type 2 (SS2) infection and its mechanism, RBC suspension was prepared from porcine blood without specific pathogenic microorganisms. According to the pre-test, the SS2, with SS2:RBC infection ratio of 100 to (MOI) was infected with RBC 0.5A 1. 5U for 2 h in vitro respectively. The morphologic changes of BRC were observed under light microscope. The adhesion and injury of SS2 to erythrocytes were detected by G iem sa staining, CF D A-SE fluorescent labeling, the adhesion rate of erythrocytes was analyzed by flow cytometry, and the SS2 related adhesion factor lysozyme releasing protein (MRP), was detected by real-time PCR. The transcriptional levels of (GAPDH), fibronectin, fibrin binding protein (FBPS) and hemolysin (Sly) in capsule polysaccharide (CPS), glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase. The results showed that at 0. 5 h after SS2 infection, the main adherent RBC, cells showed spinous process lesions, a small number of cells were swollen and slightly hemolytic, the adhesion rates were 18. 7% and 46. 3%, respectively. At 1. 5 hours after infection, SS2 not only adhered to RBC, but also hemolysis of most cells. RBC began to rupture, and the adhesion rate reached 91.7%. At the 2nd hour after infection, almost all of the cells ruptured. The transcription levels of MRP and CPS2J increased 1 hour after infection, and were positively correlated with the adhesion rate, and the expression level decreased at the second hour after infection. The transcription level of Sly increased continuously at 0.5h after infection, which was positively correlated with hemolysis, while GAPDH and FBPS did not change significantly during infection (P0.05). The results showed that SS2 infection could produce adhesion and hemolysis to RBC in the early stage, first adhesion, then hemolysis, and the course of action was faster, and the main factors involved in the adhesion were MRP and CPS2J, hemolytic factor Sly;. It is necessary to confirm whether GAPDH and FBPS are involved in the adhesion and hemolysis of SS2 to RBC, and the results provide an important theoretical basis for studying the transmission and pathogenesis of SS2.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31260616)
【分類號(hào)】：S852.611

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本文編號(hào)：2337593