發(fā)布時間：2018-11-15 09:08

【摘要】：本文通過對豬腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)基因組生物信息學(xué)分析,分別在兩種病毒基因保守區(qū)設(shè)計特異性探針和Real-Time PCR引物,并建立了檢測PEDV和TGEV的雙重實時熒光定量RT-PCR方法。結(jié)果表明,本研究建立的方法對其他常見病毒無交叉檢出,具有較強的特異性;應(yīng)用本方法對PEDV和TGEV檢測靈敏度均可達101個拷貝。應(yīng)用本法組裝PEDV和TGEV雙重實時熒光定量PCR試劑盒,該試劑盒批次內(nèi)、批次間的變異系數(shù)CV(coefficient of variation,CV)分別低于0.58%和3.7%。應(yīng)用該試劑盒對97份病例進行檢測,陽性率提高了14.93%。本研究建立的一步法熒光定量RT-PCR方法具有快速、特異性好、靈敏度高、定量且重復(fù)性和穩(wěn)定性好等優(yōu)點,在PEDV和TGEV感染的快速鑒別診斷,以及流行病學(xué)調(diào)查方面都有廣闊的應(yīng)用前景。
[Abstract]:Based on the analysis of genomic bioinformatics of porcine diarrhea virus (Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) and porcine transmissible gastroenteritis virus (Transmissible gastroenteritis virus,TGEV), specific probes and Real-Time PCR primers were designed in the conserved region of the two viruses. A dual real-time fluorescence quantitative RT-PCR method for the detection of PEDV and TGEV was established. The results showed that the method was specific to other common viruses, and the sensitivity of this method to PEDV and TGEV could reach 101 copies. PEDV and TGEV dual real-time fluorescent quantitative PCR kits were assembled by this method. The coefficient of variation (CV (coefficient of variation,CV) between batches was lower than 0.58% and 3.7% respectively. The positive rate of 97 cases was increased by 14.93%. The one-step fluorescence quantitative RT-PCR method developed in this study has the advantages of fast, specificity, high sensitivity, quantitative, reproducibility and stability. It can be used in the rapid differential diagnosis of PEDV and TGEV infection. And the epidemiology investigation has the broad application prospect.
【作者單位】： 廣東海大畜牧獸醫(yī)研究院有限公司;
【基金】：廣東省科技計劃項目——豬偽狂犬突變株的鑒定及新型、高效豬偽狂犬疫苗開發(fā)與產(chǎn)業(yè)化(2015B020203006)
【分類號】：S852.651

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本文編號：2332857