【摘要】：豬瘟是由豬瘟病毒引起的急性、熱性、高致病性和高死亡率疾病,是養(yǎng)豬業(yè)防控的重大疾病之一;疫苗免疫是防控豬瘟的最有效手段。目前,國內外豬瘟活疫苗生產(chǎn)大多采用冷凍干燥技術,通過添加冷凍干燥耐熱保護劑可使豬瘟疫苗在2～8℃條件下有效保存2年;但現(xiàn)有的耐熱保護劑配方中含有的明膠和蛋白質比例高,它們常常導致強烈的過敏、發(fā)熱等免疫副反應,影響疫苗安全性和有效性。另外,冷凍干燥疫苗仍然對環(huán)境溫度的要求比較嚴格,在保存、運輸及使用中均需要依賴較高配置的"冷鏈"系統(tǒng),給疫苗的存儲、運輸和使用帶來極大的不便。泡沫干燥技術制備的疫苗耐熱性能往往更加優(yōu)良,能夠減低對"冷鏈"系統(tǒng)的依賴性。本研究以改進豬瘟疫苗真空冷凍干燥技術和創(chuàng)新研發(fā)豬瘟疫苗泡沫干燥劑型為目的,通配方的篩選、干燥工藝的優(yōu)化和耐老化實驗,研究適用于豬瘟活疫苗真空冷凍干燥生產(chǎn)的無蛋白、無明膠凍干保護劑新配方及相應的干燥工藝,以期解決由蛋白和明膠引起的疫苗安全性問題;探索豬瘟活疫苗泡沫干燥保護劑配方并建立相應的泡沫干燥工藝,為室溫保存豬瘟活疫苗研究奠定基礎。1豬瘟活疫苗真空冷凍干燥劑型的研究冷凍干燥保護劑以蔗糖、乳糖、EDTA等為配方主要成分,通過單因素變量試驗,以配方形態(tài)、干燥疫苗形態(tài)、殘余水份含量為指標,篩選冷凍干燥豬瘟活疫苗耐熱保護劑配方,并成功篩選出了無明膠、無蛋白配方D4和傳統(tǒng)凍干保護劑配方S3-T1,D4為首個豬瘟冷凍干燥耐熱保護劑的無明膠、無蛋白配方,可有效避免使用過程中因明膠、外源蛋白引起的附帶免疫反應。在篩選出配方的基礎上,對冷凍干燥工藝進行優(yōu)化。針對凍干產(chǎn)品分層、萎縮等現(xiàn)象,通過對升華階段擱板溫度的控制和一次干燥時間的調整,以凍干產(chǎn)品的物理形態(tài)、殘余水份和37℃ 10 d耐老化為標準,最終以優(yōu)化工藝對較理想的配方D4和S3-T1進行3批次的重復,測定其病毒效價。S3-T1組疫苗37℃耐老化至16 d,效價損失在1.0滴度以內;D4組配苗37℃保存11 d后病毒滴度損失小于0.7,均符合耐老化要求。2豬瘟活疫苗泡沫干燥劑型的研究泡沫干燥保護劑以海藻糖、明膠為主要配方成分,通過單因素變量試驗,以配方形態(tài)、干燥疫苗形態(tài)、殘余水份含量為指標,篩選出泡沫干燥豬瘟活疫苗的耐熱保護劑配方。從基礎配方中挑選出T28C系列作為豬瘟泡沫干燥疫苗耐熱基礎配方,然后對其進行成分調整和工藝優(yōu)化,通過進一步的兔體溫熱實驗進行疫苗耐老化的效價檢測,選出T28C-16和T28C-38兩個耐熱保護劑配方。選出配方后,分別對泡沫一次干燥和二次干燥程序進行調整和優(yōu)化。對一次干燥發(fā)泡的關鍵階段300～200Pa之間維持的時間進行調整,發(fā)現(xiàn)維持10min時效果最好,二次干燥的時間分別以40、42和44 h進行篩選,結果表明,40 h時產(chǎn)品的殘余水份大于4%,不符合要求,干燥42h和44h產(chǎn)品殘余水份均滿足要求,而時間越長成本越高,所以最佳干燥時間為42 h。確定理想配方和最佳工藝后干燥3批次產(chǎn)品,進行耐老化測定,測得T28C-16保護劑可使豬瘟泡干疫苗耐老化37℃15 d滴度下降小于1.0,T28C-38保護劑可使豬瘟泡干疫苗耐老化37℃ 20 d滴度下降小于1.0。保護劑對兔體的干擾性試驗表明單純配方均未引起家兔的熱反應,證明所獲配方對兔體熱反應無影響。
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【學位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S859.797

【參考文獻】

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本文編號：2331544