【摘要】：鵝球蟲是一類寄生于家鵝及雁形目(Anseriformes)鳥類的消化道或腎臟細(xì)胞的寄生性原蟲,在分類上隸屬復(fù)頂亞門(Apicocomplexa)、孢子蟲綱(Sporozoa)、真球蟲目(Eumeriina)、艾美耳科(Eimeriidae),呈世界性分布。鵝球蟲種類眾多,臨床上多為混合感染,傳統(tǒng)分類方法鑒別難度較大。本研究采用單卵囊分離方法建立了鵝艾美耳球蟲(Eimeria anseris)、赫爾曼艾美耳球蟲(E. hermani)、多斑艾美耳球蟲(E. stigmosa)和金黃艾美耳球蟲(E.fulva)等4種鵝球蟲純種株,對其18S rDNA及ITS rDNA序列進行了克隆與序列分析,并分析了鵝球蟲與其他動物球蟲間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,旨在分子水平對鵝球蟲作進一步鑒別分析,為鵝球蟲的分子鑒別診斷和分子流行病學(xué)調(diào)查奠定基礎(chǔ)。1、揚州地區(qū)鵝球蟲的流行病學(xué)調(diào)查采用形態(tài)學(xué)分類方法,對揚州的高郵、江都、邗江、儀征、寶應(yīng)等不同地區(qū)的63個鵝群進行鵝球蟲檢查,感染球蟲的鵝群為57個,感染率為90.47%；3周齡以內(nèi)鵝群的球蟲感染率最低,感染率為66.66%,3-9周齡球蟲感染率最高,感染率為100%。不同地區(qū)鵝群均檢測到有較高的球蟲感染率,其中邗江、儀征、寶應(yīng)3地的鵝群球蟲感染率均高達(dá)100.00%。鵝球蟲多為混合感染,混合感染率為85.96%。共檢到1科2屬6種球蟲,其中艾美耳屬(Eimeria) 5種：鵝艾美耳球蟲(E. anseris)、赫爾曼艾美耳球蟲(E. hermani)、金黃艾美耳球蟲(E.fulva)、有毒艾美耳球蟲(E. nocens)、多斑艾美耳球蟲(E. stigmosa);泰澤屬(Tyzzeria)1種：稍小泰澤球蟲(T. parvula);其中稍小泰澤球蟲和赫爾曼艾美耳球蟲為優(yōu)勢種,其感染率分別為74.60%和65.08%。2、四種鵝球蟲的分離鑒別與純種株的建立采用單卵囊分離技術(shù),獲得了4株純種鵝球蟲,并鑒定為鵝艾美耳球蟲、赫爾曼艾美耳球蟲、多斑艾美耳球蟲與金黃艾美耳球蟲。主要鑒定指標(biāo)如下：鵝艾美耳球蟲：潛在期6d左右,幼鵝臨床癥狀明顯,部分幼鵝死亡。卵囊呈梨形,前端異常狹窄,卵囊壁為單層結(jié)構(gòu),無色,厚度約1μm,囊壁光滑,有卵膜孔,無極帽,孢子囊為卵圓形,有孢子囊殘體,卵囊大小為(18.5-22.7) μm×(14.1-19.3)μm。赫爾曼艾美耳球蟲：潛在期4 d左右,幼鵝臨床癥狀不明顯。卵囊呈卵圓形,卵囊壁為雙層結(jié)構(gòu),無色,較厚,囊壁光滑,有卵膜孔,無極帽,孢子囊為卵圓形,斯氏體不明顯,卵囊大小為(24.0～27.6)μum×(17.5～19.5)多斑艾美耳球蟲：潛在期4.5 d左右,幼鵝臨床癥狀不明顯。卵囊呈寬卵圓形,黃褐色,卵囊壁厚度為1.2-2.0μm,兩端比側(cè)面厚,囊壁表面有斑點,有卵膜孔,無極帽,孢子囊為卵圓形,孢子囊殘體為細(xì)小的顆粒,卵囊大小為(19.7～23.3)μm×(14.1～19.3)μmo金黃艾美耳球蟲：潛在期7d左右,幼鵝臨床癥狀較明顯,無幼鵝死亡。卵囊呈寬卵圓形,黃褐色,卵囊壁為雙層,外層有交叉的條紋,孢子化卵囊的窄端有一個大的折光顆粒,孢子囊有斯氏體,每個孢子囊含有粗大顆粒狀的殘體,有卵膜孔,無極帽,孢子囊殘體為細(xì)小的顆粒,卵囊大小為(25.6～32.4)μm×(20.2～25.2)3、四種鵝球蟲188區(qū)序列的克隆與序列分析在分析了多種艾美耳球蟲18SrDNA序列的基礎(chǔ)上,設(shè)計一對艾美耳屬球蟲的通用引物,分別對鵝艾美耳球蟲、赫爾曼艾美耳球蟲、多斑艾美耳球蟲、金黃艾美耳球蟲18S rDNA部分序列進行PCR擴增、克隆和測序,并用DNAstar軟件對這4種鵝球蟲與15種艾美耳球蟲的18S rDNA序列進行同源性分析,最后以火雞組織滴蟲為外類群,采用鄰接法構(gòu)建了4種鵝球蟲與29種艾美耳亞目原蟲的18S rDNA序列系統(tǒng)進化樹。結(jié)果顯示,鵝艾美耳球蟲、赫爾曼艾美耳球蟲、多斑艾美耳球蟲和金黃艾美耳球蟲的18S rDNA部分序列長度分別為1695 bp、1696 bp、1703 bp、1694 bp蟲種間的相似性以4種鵝球蟲最高,其次為鵝球蟲與鶴源艾美耳球蟲。在系統(tǒng)發(fā)育樹中,艾美耳屬球蟲與成囊類球蟲各形成一個單系分支；錦鯉的艾美耳球蟲與其他動物的艾美耳球蟲形成姊妹群關(guān)系；濕地鳥類的艾美耳球蟲聚合為一分支,雞形目和哺乳類動物的艾美耳球蟲形成另一分支。本研究為利用18SrDNA序列來鑒定鵝球蟲種類奠定了理論基礎(chǔ)。4、四種鵝球蟲ITS區(qū)序列的克隆與序列分析用一對艾美耳屬球蟲ITS rDNA序列的通用引物,分別對鵝艾美耳球蟲、赫爾曼艾美耳球蟲、多斑艾美耳球蟲、金黃艾美耳球蟲ITS rDNA序列進行PCR擴增、克隆和測序,并用DNAstar軟件對這4種鵝球蟲的ITS rDNA序列進行同源性分析,最后以火雞組織滴蟲為外類群,采用最大簡約法分別構(gòu)建4種鵝球蟲的ITS全序列進化樹以及與其它多種不同艾美耳亞目原蟲的ITS全序列、ITS-1序列、ITS-2序列的系統(tǒng)進化樹。結(jié)果顯示,鵝艾美耳球蟲、赫爾曼艾美耳球蟲、多斑艾美耳球蟲和金黃艾美耳球蟲的ITS rDNA序列長度分別為1051 bp、1000 bp、926bp、1073bp。4種鵝球蟲5.8S序列相似性最高,ITS-1序列相似性最低,ITS全序列及ITS-2序列相似性相近。從4種鵝球蟲的ITS全序列進化樹來看,形態(tài)學(xué)具有一定相似性的鵝球蟲同樣表現(xiàn)出在進化關(guān)系上的親近性,而其它三個進化樹并不能很好的描述不同動物源球蟲之間的進化關(guān)系。本研究顯示ITS rDNA序列適用于鵝球蟲的分類鑒定及種下進化分析。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.7

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 及連盈;安勝英;劉觀忠;;獺兔艾美耳球蟲病的防治[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2005年12期

2 林青,于三科;雞艾美耳球蟲病免疫研究進展[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)(自然科學(xué)版);2001年07期

3 臧為民,張龍現(xiàn),寧長申,劉紅英,趙金鳳,晏楊;河南省畜禽球蟲物種多樣性報告[J];河南畜牧獸醫(yī);2003年09期

4 嚴(yán)春霞;劉慧泉;韓巧珍;嚴(yán)忠誠;;鵪鶉艾美耳球蟲病的診治[J];家禽科學(xué);2006年06期

5 孟慶玲;田廣孚;閆鴻斌;張冬峰;;新疆部分地區(qū)兔球蟲種類調(diào)查研究[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2007年08期

6 閻曉菲;韓紅玉;黃兵;岳城;趙其平;姜連連;董輝;卞慶松;張建哲;;堆形艾美耳球蟲巨噬細(xì)胞移動抑制因子的克隆和表達(dá)[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報;2008年11期

7 賀安祥;蔣忠榮;葉忠明;汪濤;楊光友;尹東云;蔣軍;;牦牛球蟲病的流行病學(xué)調(diào)查[J];中國畜牧獸醫(yī);2009年06期

8 李玉劍;董輝;韓靜芳;岳城;黃兵;韓紅玉;趙其平;姜連連;郭濤;李洋;平憲卿;;堆形艾美耳球蟲早熟株選育及相關(guān)生物學(xué)特性研究[J];中國動物傳染病學(xué)報;2009年03期

9 崔平;方素芳;顧小龍;郭兵;;河北省部分地區(qū)兔球蟲種類及感染率調(diào)查[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報;2010年07期

10 陶立;韋志鋒;蘭美益;蔣橋明;秦若甫;藍(lán)顯利;陸以全;韋青藏;計安華;潘宗康;陳澤祥;楊威;;廣西圈養(yǎng)山羊球蟲種類和感染狀況的調(diào)查[J];畜牧與獸醫(yī);2011年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉德昊;楊光友;吳開波;趙小平;張萬平;;四川滎經(jīng)縣長毛兔球蟲病的流行病學(xué)調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

2 李玉劍;董輝;韓靜芳;岳城;韓紅玉;趙其平;姜連連;樊玉娟;姚倩;顏彥;黃兵;;堆形艾美耳球蟲早熟株選育及相關(guān)生物學(xué)特性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

3 李建梅;劉丹丹;王尚尚;曹李琴;陶建平;;毒害、和緩和早熟艾美耳球蟲的分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

4 陶建平;許金俊;曹永萍;戴亞斌;沈永林;;家鵝球蟲種類鑒定及國內(nèi)一新記錄種[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

5 范歡;陳帆;盧軍霞;秦建華;;鵪鶉角田艾美耳球蟲的分離鑒定和致病性觀察[A];2010畜牧業(yè)與低碳經(jīng)濟科技論文集[C];2010年

6 尹遜河;王樹迎;邱建華;李方正;劉燕;李玉香;;一氧化氮和一氧化氮合酶在兔斯氏艾美耳球蟲感染時的變化規(guī)律及抗球蟲作用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十四次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

7 錢德興;;貴州省豬球蟲種類調(diào)查初報[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第五次代表大會暨第八次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2004年

8 林青;張海芬;于三科;李靖寧;;陜西楊凌地區(qū)家兔球蟲種類及感染情況調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

9 董輝;趙其平;韓紅玉;程軍;姜連連;朱順海;曾艷波;馬衛(wèi)嬌;黃兵;;上海地區(qū)鴿球蟲感染情況調(diào)查與種類鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第三次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

10 黃兵;沈杰;趙其平;廖黨金;;中國雞球蟲種類與地理分布[A];動物學(xué)專輯——上海市動物學(xué)會2001年年會論文集[C];2001年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 唐式校 陳雪梅 時芝紅 李前福 李成珍;用藥要有針對性[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報;2006年

2 唐式校;雞抗球蟲病用藥問題四注意[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 秦梅;融合表達(dá)IgY/IgG Fc片段和H9N2禽流感病毒HA1轉(zhuǎn)基因艾美耳球蟲的構(gòu)建及免疫原性研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 朱水明;四種鵝球蟲18S與ITS rDNA序列的克隆及系統(tǒng)發(fā)育分析[D];揚州大學(xué);2015年

2 張新宇;和緩艾美耳球蟲與早熟艾美耳球蟲江蘇株的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 田思勤;兔6種艾美耳球蟲線粒體基因組序列測定及系統(tǒng)發(fā)生研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2014年

4 祖尼薩·阿布都克熱木;家兔斯氏艾美耳球蟲楊凌株生物學(xué)特性和致病性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

5 蔡蘭;雞艾美耳球蟲核糖體小亞基序列分析[D];上海師范大學(xué);2006年

6 王巖;河南省某些地區(qū)家兔球蟲感染情況調(diào)查及黃艾美耳球蟲內(nèi)生發(fā)育史研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 高云路;雞四種艾美耳球蟲重組蛋白免疫保護性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

8 李玉劍;堆形艾美耳球蟲早熟株生物學(xué)特性及其抑制消減cDNA文庫的構(gòu)建[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 劉燕;一氧化氮和一氧化氮合酶在兔斯氏艾美耳球蟲感染時的變化規(guī)律及抗球蟲作用的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 李玉香;一氧化氮對兔斯氏艾美耳球蟲作用的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

，

本文編號：2330451