【摘要】：三聚氰胺(Melamine, MA)作為重要的有機化工原料被廣泛應用于人們的生產(chǎn)、生活中,三聚氰胺在遇到強酸、強堿胺基被羥基取代發(fā)生水解,生成三聚氰酸。三聚氰胺和三聚氰酸聯(lián)合作用對動物機體毒性增加,主要導致動物腎臟毒性增強。目前,關于該類化合物對免疫系統(tǒng)影響的研究報道很少,Lazarova在2004年報道了由于接觸乙烯脲三聚氰胺甲醛和三聚氰胺甲醛發(fā)生過敏而感染紡織性皮炎的事件,引起作者關于該類化合物對動物機體免疫系統(tǒng)危害的思考,本論文旨在研究三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合對雄性小鼠體液免疫的影響,為完善三聚氰胺與三聚氰酸的免疫毒理學評價資料提供理論依據(jù)。試驗一三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合對攻毒大腸桿菌小鼠抵抗力影響研究方法：將144只雄性KM小鼠隨機分為8組,空白對照組、大腸桿菌陽性對照組,三聚氰胺高、中、低劑量組(50mg/kg、10 mg/kg、2mg/kg)、三聚氰胺與三聚氰酸聯(lián)合高、中、低(25+25 mg/kg、5+5 mg/kg、1+1 mg/kg)劑量組,試驗組隔天灌胃15d后,大腸桿菌陽性對照組和試驗組腹腔注射大腸桿菌,48 h后檢測小鼠脾臟T、B淋巴細胞轉(zhuǎn)化率、血清溶血素光密度值、小鼠遲發(fā)性變態(tài)免疫反應等指標。結(jié)果表明：①三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合對小鼠脾臟指數(shù)無顯著性變化(P0.05)。②三聚氰胺組和聯(lián)合攻毒組會使B淋巴細胞轉(zhuǎn)化率降低,混合高劑量組轉(zhuǎn)化率最低(P0.05)。③二者聯(lián)合攻毒時會使小鼠血清溶血素光密度值降低(P0.01)。④三聚氰胺和與三聚氰酸聯(lián)合都是隨著攻毒劑量的升高T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率呈現(xiàn)出下降趨勢,但未出現(xiàn)顯著性變化(P0.05)。⑤遲發(fā)型變態(tài)免疫反應發(fā)現(xiàn)三聚氰胺高劑量組、聯(lián)合中、高劑量組會使小鼠足趾部增厚度下降,差異極顯著(P0.01)。說明,三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合能夠降低小鼠對大腸桿菌的抵抗力。試驗二 三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合對雄性小鼠脾臟漿細胞及其相關免疫球蛋白、補體的影響研究研究方法：將42只體重為18-22g的雄性小鼠隨機分為7組,空白對照組,三聚氰胺低、中、高劑量組,三聚氰胺與三聚氰酸聯(lián)合低、中、高劑量組,劑量同試驗一,流式細胞術檢測小鼠脾臟漿細胞細胞表面MarkerCD138+含量變化,western blot檢測小鼠脾臟Blimp-1蛋白表達量,酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測小鼠血清抗體IgG、sIgA和補體C3。結(jié)果表明：①三聚氰胺單獨和聯(lián)合攻毒均可以導致Blimp-1蛋白表達下降,而且隨著攻毒濃度的升高呈遞減趨勢,聯(lián)合攻毒組漿細胞MarkerCD138+含量極顯著降低(P0.01),說明該類化合物劑能夠使能夠通過降低小鼠脾臟Blimp-1調(diào)控蛋白來降低脾臟漿細胞表面Marker CD138+蛋白,在一定程度上干擾漿細胞的活性。②低劑量的三聚氰胺會使IgG得含量降低(P0.05),三聚氰胺與三聚氰酸聯(lián)合中劑量也會使sIgA含量降低(P0.05)。③聯(lián)合攻毒作用下,小鼠血清補體C3含量降低,其中,中劑量組差異顯著(P0.05),高劑量組差異極顯著(P0.01)。說明該類化合物能夠影響機體的體液免疫水平。試驗三三聚氰胺及其與三聚氰酸對雄性小鼠Tfh細胞和Th2細胞亞群相關細胞因子的影響研究方法：小鼠分組及處理同試驗二,流式細胞術檢測小鼠脾臟Tfh細胞表面Marker CD4+CXCR5+含量,酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測小鼠血清IL-4、IL-6、IL-10、IL-21的含量,western blot檢測小鼠脾臟GATA-3蛋白表達量,qRT PCR檢測GATA-3 mRNA基因表達水平。結(jié)果表明：①三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合對小鼠Tfh脾臟細胞表面MarkerCD4+CXCR5+含量變化無影響(P0.05),聯(lián)合高劑量組會使小鼠血清中的IL-21蛋白含量極顯著下降(P0.01)。②小鼠血清IL-4、IL-6、IL-10變化顯示,二者聯(lián)合會使IL-4含量降低(P0.05或P0.01),二者聯(lián)合也會使IL-4含量降低,差異極顯著(P0.01)；三聚氰胺單獨與聯(lián)合攻毒均能使小鼠血清中的IL-6含量降低,混合攻毒下降極顯著(P0.01)；同時,各攻毒組都能使IL-10含量極顯著下降(P0.01)。③GATA-3蛋白和GATA-3 mRNA表達水平顯示,聯(lián)合攻毒時隨著攻毒劑量的升高,GATA-3蛋白表達量逐漸降低,當攻毒劑量達到25+25 mg/kg時,GATA-3蛋白表達量最低,差異顯著。(P0.05)；各攻毒組GATA-3 mRNA的表達水平雖與對照組無顯著差異(P0.05),但也均有所降低,說明三聚氰胺及其與三聚氰酸聯(lián)合高劑量組可能會通過抑制Gata3 mRNA基因表達來降低Gata-3蛋白的生成,提示動物機體內(nèi)Th2型細胞受到影響,從而干擾Th2細胞合成分泌相關細胞因子,從而對體液免疫產(chǎn)生抑制作用。
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【學位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S859.8

【參考文獻】

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本文編號：2326593