【摘要】：從免疫過rSpaA的豬的脾淋巴細(xì)胞中提取總RNA,采用RT PCR技術(shù)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。設(shè)計(jì)兼并引物擴(kuò)增抗體重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)基因片段,采用重疊延伸PCR方法,將VH和VL通過Linker連接成重組單鏈抗體(以下簡(jiǎn)寫為sc Fv)的基因片段。將sc Fv的基因連接至噬菌粒載體p Comb3Xss,將重組載體電轉(zhuǎn)化至宿主菌XL1-Blue,并經(jīng)輔助噬菌體M13KO7拯救,獲得豬源噬菌體單鏈抗體庫,庫容約為2.5×106。以rSpaA為靶抗原,經(jīng)免疫親和篩選,獲得8株特異性較好的陽性克隆。本研究結(jié)果可為制備抗紅斑丹毒絲菌的重組sc Fv提供新途徑,并為豬丹毒的免疫檢測(cè)和綜合防制提供材料基礎(chǔ)。
[Abstract]:Extraction of total RNA, from spleen lymphocytes of pigs immunized with rSpaA and reverse transcription synthesis of cDNA. using RT PCR technique Degenerate primers were designed to amplify the fragments of heavy chain variable region (VH) and light chain variable region (VL) of antibody. By means of overlapping extension PCR, VH and VL were linked with Linker to form recombinant single chain antibody (hereinafter referred to as sc Fv) gene fragment). The sc Fv gene was ligated to the phagocyte vector p Comb3Xss,. The recombinant vector was electrotransformed into the host strain XL1-Blue, and rescued by auxiliary bacteriophage M13KO7. The porcine phage scFv library was obtained and the library capacity was about 2.5 脳 106. Using rSpaA as the target antigen, 8 positive clones with good specificity were obtained by immuno-affinity screening. The results can provide a new way for the preparation of recombinant sc Fv against erysipelas and provide a material basis for the immunoassay and comprehensive control of porcine erysipelas.
【作者單位】： 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31272652) 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS 46 42)
【分類號(hào)】：S858.28

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本文編號(hào)：2321594