【摘要】：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)為禽C型逆轉(zhuǎn)錄病毒,感染后主要引發(fā)禽類生長抑制、急性網(wǎng)狀細胞腫瘤、淋巴以及其他組織的慢性腫瘤。在該病的發(fā)生、發(fā)展過程中,免疫抑制起到了至關(guān)重要的作用,但是其潛在的分子機制尚不清楚。本研究以REV SNV-C5株人工接種SPF雞,初步探討了免疫抑制過程中可能發(fā)揮作用的細胞因子及相關(guān)信號通路。大蒜素是大蒜的主要有效成分,對多種病毒和致病菌均有良好的抵抗能力。針對REV感染,目前尚缺乏安全有效的疫苗及特效藥物進行防制。本研究采用添加不同濃度大蒜素的日糧飼喂REV感染的SPF雞,探討大蒜素對REV感染雞的免疫調(diào)節(jié)作用,以期為合理有效的防控REV提供新的思路。研究一大蒜素緩解REV感染引起的SPF雞生長抑制及免疫抑制試驗采用100TCID50 REV攻毒處理7d SPF雛雞后飼喂添加有不同濃度大蒜素(0、300mg/kg、600mg/kg)的日糧,并設(shè)置大蒜素單獨處理組(0、150mg/kg、300mg/kg)。于感染后2W、3W、4W、5W采集胸腺、脾臟和法氏囊樣品。研究結(jié)果表明,與對照組相比,REV感染后2W始顯著抑制了SPF雞的生長發(fā)育(P0.0001),胸腺(P0.05)、法氏囊指數(shù)(P0.05)顯著降低,脾臟指數(shù)顯著升高(P0.05),脾臟淋巴細胞活性降低(P0.05)。添加300mg/kg大蒜素日糧有效緩解了REV感染引起的生長抑制(P0.0001)及免疫器官異常發(fā)育(P0.05),提高脾臟淋巴細胞活性(P0.0001)。單獨飼喂大蒜素對機體生長發(fā)育無顯著影響(P0.05)。上述結(jié)果表明REV感染引起了機體的免疫抑制,大蒜素有效緩解REV感染誘導(dǎo)的免疫抑制。研究二大蒜素緩解REV引起SPF雞的炎性反應(yīng)應(yīng)用研究一中模型,檢測大蒜素及REV處理對試驗雞內(nèi)源性免疫相關(guān)炎性因子表達的影響。結(jié)果顯示,REV感染后顯著提高促炎性因子IL-1(P0.01)、TNF-α(P0.01)、IFN-γ(P0.01),抗炎因子IL-4(0.01)、IL-10(P0.05)的含量及其轉(zhuǎn)錄水平。REV感染雞脾臟中MDA5(P0.05)、TLR3(P0.05)、TLR4(P0.01)、TLR7(P0.05)及其接頭分子MyD88(P0.05)表達水平顯著升高。炎性信號通路MAPK包括p38(P0.05)、ERK(P0.05)、JNK(P0.05)磷酸化水平顯著升高,NF-κB移位入核(P0.01)顯著增加。此外,STAT6信號通路在REV感染過程中轉(zhuǎn)錄水平顯著升高(P0.01),促進下游ISG12-1(P0.05)、IRF(P0.01)轉(zhuǎn)錄表達。大蒜素有效抑制了炎性因子以及TLRs等受體的異常變化變化,降低MAPK、NF-κB的磷酸化水平。此外,研究發(fā)現(xiàn),ERK抑制劑能夠抑制REV基因復(fù)制(P0.0001)。上述結(jié)果表明,REV侵入機體后可能與TLRs及MDA5等模式識別受體結(jié)合,激發(fā)炎性反應(yīng),引發(fā)機體內(nèi)源性免疫應(yīng)答,而大蒜素抑制了REV的復(fù)制,緩解感染引起的炎癥反應(yīng),揭示大蒜素對REV感染有一定的緩解作用。研究三大蒜素減輕REV感染導(dǎo)致SPF雞氧化損傷應(yīng)用研究一中模型,檢測大蒜素及REV處理對試驗雞抗氧化系統(tǒng)的影響。結(jié)果顯示,與對照組相比,REV感染后血清中CAT(P=0.1024)、SOD(P0.05)、GPx(P0.05)活性顯著降低,GSH含量降低(P0.05),MDA(P0.05)和蛋白質(zhì)羰基(P0.01)含量顯著升高。REV長期感染導(dǎo)致胸腺中抗氧化酶活性降低,氧化應(yīng)激產(chǎn)物含量升高,胸腺(P0.05)、脾臟(P0.05)中Nrf2磷酸化水平升高,表明REV感染導(dǎo)致機體一定程度的氧化損傷,破壞機體的抗氧化-氧化平衡。REV感染后飼喂大蒜素有效提高抗氧化酶活性,減少Nrf2入核,提高機體抗氧化能力。研究四大蒜素及REV感染對脂肪細胞的影響研究一發(fā)現(xiàn)REV感染顯著降低了機體腹脂沉積量(P0.05)。本試驗初步探討了REV感染對脂肪細胞的影響以及大蒜素的作用。試驗應(yīng)用15胚齡的SPF雞胚建立體外脂肪細胞培養(yǎng)模型,分別用0 TCID50、5 TCID50、10 TCID50、20 TCID50、40 TCID50 REV處理誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細胞0h、12h、24h、48h、72h,發(fā)現(xiàn)20 TCID50、40 TCID50 REV感染脂肪細胞1h后顯著促進脂肪細胞因子TNF-α的表達(P0.01),磷酸化p38(P0.01)、ERK(P0.0001)、JNK(P0.0001)以及NF-κB(P0.0001),表明REV感染引起了脂肪細胞內(nèi)炎癥反應(yīng)。REV感染脂肪細胞后激活了AMPK(P0.0001)信號途徑,促進了脂肪細胞內(nèi)能量代謝,抑制了細胞內(nèi)TG(P0.1)的合成以及PPARγ(P0.0001)的轉(zhuǎn)錄。分別采用5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL大蒜素處理REV感染的脂肪細胞24h、48h、72h后發(fā)現(xiàn),25μg/mL、50μg/mL大蒜素處理24h后顯著抑制了TNF-α的轉(zhuǎn)錄(P0.01),降低了MAPK、NF-κB以及AMPK磷酸化水平,表明大蒜素改善了REV誘導(dǎo)細胞內(nèi)炎性應(yīng)激及能量代謝改變。綜上所述,REV感染導(dǎo)致機體生長抑制,可能是通過引起機體一定程度的炎性反應(yīng)和氧化損傷誘導(dǎo)機體免疫力降低。大蒜素顯著提高REV感染雞抗炎、抗氧化能力,表明大蒜素對REV感染有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。
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【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S858.31

【參考文獻】

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本文編號：2316160