【摘要】：為獲得貉IgG抗體序列,分析其活性多肽功能,從而為貉源疾病治療研究奠定免疫學基礎。本研究通過RTPCR成功克隆貉IgG保守區(qū)基因,借助3′RACE以及overlap-PCR技術成功獲得其IgG全長。運用在線軟件分析其Fc區(qū)功能位點,人工合成IgG-Fc區(qū)多肽NTVSITCLVK(N10K),PSVYVLPPSQ(P10Q)及陰性對照多肽MSTAVSKCAT(NC)。多肽在不同濃度下與小鼠外周血淋巴細胞共培養(yǎng)18h檢測上清液中細胞因子含量(TNF-α,IL-1β,IL-6),發(fā)現(xiàn)在質量濃度為10mg/L時,多肽N10K可以刺激淋巴細胞分泌更多的TNF-α(271.95ng/L),IL-1β(27.42ng/L),而多肽P10Q可以促進淋巴細胞產生較多的IL-6(35.51ng/L)。本研究成功克隆貉IgG重鏈核酸序列,初步確定貉IgG-Fc區(qū)多肽P10Q及N10K對外周血淋巴細胞的體外免疫誘導活性,同時為今后貉源疾病預防及治療奠定基礎,為研究DNA疫苗、Fc生物佐劑、多肽疫苗及單克隆抗體制備提供了試驗依據(jù)。
[Abstract]:In order to obtain the sequence of raccoon dog IgG antibody and analyze the function of its active polypeptide, the immunological foundation was established for the treatment of raccoon dog disease. In this study, the conserved gene of raccoon dog IgG was cloned by RTPCR, and the whole length of IgG was obtained by 3'RACE and overlap-PCR. The functional sites of Fc region were analyzed by on-line software. NTVSITCLVK (N10K), PSVYVLPPSQ (P10Q) and MSTAVSKCAT (NC). (negative control polypeptide) were synthesized by artificial synthesis of IgG-Fc region polypeptide NTVSITCLVK (N10K), PSVYVLPPSQ (P10Q) and negative control polypeptide MSTAVSKCAT (NC). The levels of cytokines (TNF- 偽, IL-1 尾, IL-6) in the supernatant were determined by co-culture of polypeptides with peripheral blood lymphocytes of mice at different concentrations for 18 h. It was found that when the mass concentration was 10mg/L, the levels of cytokines in the supernatant were determined. Polypeptide N10K can stimulate lymphocytes to secrete more TNF- 偽 (271.95ng/L) and IL-1 尾 (27.42ng/L), while polypeptide P10Q can stimulate lymphocytes to produce more IL-6 (35.51ng/L). In this study, IgG heavy chain nucleic acid sequences were cloned successfully, and the in vitro immunogenicity of IgG-Fc polypeptides P10Q and N10K on peripheral blood lymphocytes was preliminarily determined, which laid a foundation for the prevention and treatment of raccoon dog origin diseases in the future and for the study of DNA vaccine. The preparation of Fc biological adjuvant, polypeptide vaccine and monoclonal antibody provides experimental basis.
【作者單位】： 泰安市動物衛(wèi)生監(jiān)督所;山東農業(yè)大學動物科技學院;肥城市畜牧獸醫(yī)局;煙臺市牟平區(qū)姜格莊街道畜牧獸醫(yī)站;山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院;
【基金】：山東省毛皮動物創(chuàng)新團隊濱州綜合試驗站資助項目(SAT-180-011-15)
【分類號】：S858.92

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6 郭錦s，

本文編號：2311657