【摘要】：本實驗旨在探索LPS模擬的炎癥模型下,豬背最長肌中能量代謝的變化,以期能全面的評價炎癥對豬骨骼肌的影響,并闡明可能的機制,為今后找到合適的緩解治療藥物提供理論基礎(chǔ)。實驗分為兩組:正常對照組和LPS處理組,分析肌肉中ATP、ADP等的濃度,研究LPS處理后肌肉糖酵解水平、線粒體功能和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能的變化情況,并檢測了胞漿和線粒體中鈣離子濃度的變化;此外還分析了 LPS處理對肌肉生長分化相關(guān)調(diào)節(jié)因子基因表達(dá)情況的影響。1 LPS處理對豬背最長肌能量代謝的影響選擇12 ± 0.5 kg的雄性杜x長x大三元仔豬12頭,按體重相接近隨機分為2組:對照組和LPS(15 μg/kg BW)注射組,對照組注射相同體積的生理鹽水。注射6 h后屠宰采樣,用含抗凝素的EP管收集頸部靜脈血液樣品,并制得血清同采集的肌肉組織一并放入-80℃冰箱保存。利用全自動生化分析儀,檢測血液中的血糖和乳酸含量;利用高壓液相檢測肌肉組織中ATP、ADP等能量基本物質(zhì)的含量;利用試劑盒檢測了相關(guān)酶活和鈣離子濃度;并利用RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測了相關(guān)基因、蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,LPS注射6h后血糖并沒有發(fā)生顯著性變化,但是血液中乳酸卻顯著性上升。NADH的含量顯著性上調(diào)(P0.05),NADH/NAD+的比值和ATP的含量有上升的趨勢(P=0.064);ATP、ADP、AMP和NAD+無顯著性變化。糖酵解的大部分關(guān)鍵基因都顯著性上升(P0.05);糖酵解通路的3個關(guān)鍵酶HK、LDH和PK的酶活都顯著性上調(diào)了(P0.05)。線粒體自身編碼的基因并沒有顯著性變化,但是線粒體復(fù)合物I和Ⅳ的酶活顯著性上升(P0.05),而線粒體中ATP的含量顯著性下降(P0.05)。UCP3的基因顯著性上調(diào)(P0.05),蛋白無顯著性變化。由于線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能之間相互偶聯(lián),我們檢測了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的狀態(tài),結(jié)果顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的大部分基因都顯著性上調(diào),標(biāo)志性蛋白BIP顯著性下降(P0.05),CHOP蛋白顯著性上調(diào)(P0.05)。鈣離子的檢測結(jié)果顯示,細(xì)胞內(nèi)總體鈣離子的濃度無顯著性變化,但是線粒體內(nèi)的鈣離子濃度顯著升高(P0.05)。我們的結(jié)果提示LPS處理顯著增強了肌細(xì)胞的糖酵解途徑,并可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體之間的鈣交流,介導(dǎo)了肌細(xì)胞線粒體的功能紊亂。2肌肉注射LPS對豬背最長肌生長相關(guān)基因的影響選擇12頭體重約為12 ± 0.5 kg的雄性杜x長x大三元仔豬,并隨機分為2組:對照組和LPS(15μg/kgBW)注射組,對照組注射相同體積的生理鹽水。注射6 h后屠宰采樣,樣品保存于-80℃冰箱。RT-PCR的結(jié)果顯示LPS處理組IGF-1的基因顯著性下降(P0.05),但是IGF1R和mTOR的基因表達(dá)無顯著性變化。自噬相關(guān)基因LC3顯著性上升了(P0.05),ULK和ATG6有上升的趨勢(P =0.063),ATG7和ATG9無顯著性變化。蛋白檢測的結(jié)果顯示ATG7無顯著性變化。檢測泛素蛋白酶系統(tǒng)的幾個關(guān)鍵基因的變化,結(jié)果顯示Foxo1、atrogin-1和MuRF-1的基因顯著性上調(diào)(P0.05)。蛋白檢測的結(jié)果顯示MuRF-1無顯著性變化。MSTN的基因和蛋白表達(dá)水平均無顯著性變化。檢測MRFs家族的基因和蛋白表達(dá),結(jié)果顯示MyoD和MyoG都顯著性下降(P0.05),而Myf5和Myf6的基因顯著性上調(diào)(P0.05)。MyoG、Myf5和Myf6的蛋白檢測顯示其表達(dá)均無顯著性變化。我們的結(jié)果提示LPS注射后顯著下調(diào)了 IGF-1的表達(dá),同時也增加肌肉萎縮的自噬和泛素蛋白酶系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá),可能對肌肉生長產(chǎn)生不利影響。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S828

【參考文獻(xiàn)】

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3 左群;于新凱;李男;;骨骼肌損傷和修復(fù)中炎癥細(xì)胞因子作用的研究進展[J];中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2012年09期

4 程波;李利;王林杰;張紅平;;MEF2基因家族的研究進展[J];中國畜牧雜志;2012年15期

5 王慧;羅勇;;Atrogin-1和MuRF-1在肌肉萎縮中的作用機制及影響因素[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2012年11期

6 薄海;王遜;陳U_祥;吉力立;張勇;;耐力運動促進骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞線粒體能量代謝及其對成肌分化的影響[J];中國運動醫(yī)學(xué)雜志;2012年05期

7 趙星宇;王云亭;;參與骨骼肌損傷后再生的生長因子研究進展[J];中日友好醫(yī)院學(xué)報;2012年02期

8 常曉彤;輦曉峰;王振輝;;Toll樣受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究進展[J];生理科學(xué)進展;2011年05期

9 趙曉;莫德林;張悅;龔雯;李安寧;陳瑤生;;豬的骨骼肌生長發(fā)育研究進展[J];生命科學(xué);2011年01期

10 夏元平;王立花;樊燕蓉;;細(xì)胞凋亡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機制[J];藥學(xué)與臨床研究;2010年03期

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1 朱康平;豬肌肉糖酵解潛力及幾個重要代謝調(diào)控基因的表達(dá)與肉質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)性分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

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本文編號：2311066