【摘要】：基于已有研究,發(fā)現(xiàn)皮膚真菌患病犬樣本中94.29%的犬為單一真菌種類病原體�？紤]到犬小孢子菌的高感染率及存在動(dòng)物到人的傳染風(fēng)險(xiǎn),本研究選取犬小孢子菌感染犬作為研究對象。從新獸藥的臨床前研究減少動(dòng)物的使用量和從眾多可供使用的藥物中篩選療效更好的藥物這2個(gè)因素出發(fā),本研究采用個(gè)體犬分離的真菌感染特制的組織工程皮膚試劑盒,以檢測待使用的外用抗真菌藥物,探索在治療犬小孢子菌感染中的應(yīng)用。其中,為了對試劑盒的結(jié)構(gòu)特別是角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性的反復(fù)測試及探索一套組織工程皮膚試劑盒的運(yùn)輸培養(yǎng)基,本研究還對組織工程皮膚的表皮層結(jié)構(gòu)和運(yùn)輸培養(yǎng)基進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化。1 組織工程皮膚的構(gòu)建及試劑盒組裝利用培養(yǎng)的犬皮膚成纖維細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞能夠成功構(gòu)建出組織工程皮膚。經(jīng)切片和HE染色檢測顯示,成纖維細(xì)胞與自分泌細(xì)胞外基質(zhì)的復(fù)合物經(jīng)過處理并未殘存活細(xì)胞成分,角質(zhì)形成細(xì)胞緊密貼附于成纖維細(xì)胞與自分泌細(xì)胞外基質(zhì)的復(fù)合物表面,并增殖分化為多層細(xì)胞成分,具有與犬天然皮膚類似的表皮層微結(jié)構(gòu),包括角質(zhì)層、顆粒層和基底層。2 組織工程皮膚試劑盒表皮層結(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)化為了對組織工程皮膚的表皮層標(biāo)準(zhǔn)化,通過定量的方式計(jì)算表皮層屏障功能總積分,試驗(yàn)組為8分,對照組為6分。組織工程皮膚的等級(jí)評(píng)定為:試驗(yàn)組"優(yōu)秀",對照組"良好",顯然試驗(yàn)組在屏障功能上優(yōu)于對照組。3 組織工程皮膚試劑盒運(yùn)輸培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)化為了對組織工程皮膚試劑盒的運(yùn)輸條件特別是運(yùn)輸時(shí)營養(yǎng)供給標(biāo)準(zhǔn)化,通過定量的方法計(jì)算出運(yùn)輸后的組織工程皮膚屏障功能總積分7分,等級(jí)評(píng)定為“優(yōu)秀",與對照組無顯著差異。4試劑盒在治療犬小孢子菌感染中的應(yīng)用從犬患處分離真菌,經(jīng)過純化培養(yǎng)和鑒定培養(yǎng)篩選出犬小孢子菌,并將菌接種于預(yù)先制備好的組織工程皮膚檢測試劑盒孵育6h,之后對試驗(yàn)組和對照組進(jìn)行組織學(xué)染色和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)分析,結(jié)果顯示藥物作用試驗(yàn)組,鹽酸特比奈芬、硝酸咪康唑和環(huán)吡酮胺組抗感染藥物阻斷效率AIDE平均值分別為:87.45%、72.50%和69.14%。樣本犬用藥前臨床癥狀積分為2,動(dòng)物治療試驗(yàn)顯示,鹽酸特比奈芬組在3w時(shí)臨床癥狀積分為0,臨床癥狀積分下降指數(shù)SSRI已達(dá)100%并持續(xù)至4w;硝酸咪康唑和環(huán)吡酮胺組4w時(shí)臨床癥狀積分為1和0,對應(yīng)的SSRI分別為50%、100%。
[Abstract]:Based on previous studies, 94.29% of canines with skin fungi were found to be single fungal pathogens. Considering the high infection rate of microsporozoa canis and the risk of animal to human infection, this study selected the canine microsporozoa infection dog as the research object. Based on the two factors of reducing the use of new veterinary drugs in preclinical studies and screening more effective drugs from many available drugs, a tissue engineering skin kit specially designed for fungal infection in dogs was used in this study. To detect the external antifungal drugs to be used and to explore the application in the treatment of canine microsporozoa infection. Among them, in order to repeatedly test the structure of the kit, especially the stability of the cuticle structure, and to explore a set of transport medium for tissue engineering skin test kit, The structure of the epidermis and the transport medium of tissue engineered skin were standardized. 1 the construction of tissue engineered skin and the assembly of the kit could successfully use the cultured canine skin fibroblasts and keratinocytes Tissue engineered skin was constructed. The results of sections and HE staining showed that the complex of fibroblast and extracellular matrix (ECM) did not remain alive after treatment, and the keratinocytes were closely attached to the surface of the complex between fibroblast and extracellular matrix (ECM). They proliferate and differentiate into multilayer cellular components with epidermal microstructures similar to those of canine natural skin, including the cuticle. In order to standardize the surface of tissue engineering skin, the total integral of the barrier function of the epidermis was calculated by quantitative method, and the test group was 8 points. The control group was 6 points. The grade of tissue engineering skin was "excellent" in the test group and "good" in the control group. Obviously, the test group was superior to the control group in barrier function. 3 the transport medium of tissue engineered skin kit was standardized in order to standardize the transport conditions of tissue engineering skin kit, especially the nutrition supply during transportation. The total score of skin barrier function of tissue engineering after transportation was calculated by quantitative method, which was rated as "excellent", and there was no significant difference between the control group and the control group. 4 the application of the kit in the treatment of microsporozoa infection in dogs was used to isolate fungi from the affected areas of dogs. Microsporozoa canis was screened by purified culture and identified and incubated with tissue engineering skin detection kit for 6 hours. Then histological staining and flow cytometry analysis were performed on the experimental group and control group. The results showed that the average value of AIDE of anti-infective drugs in the experimental group, terbinafine hydrochloride group, miconazole nitrate group and cyclopyranone amine group was 87.4575% and 69.14%, respectively. The clinical symptom score of the dogs before treatment was 2. The clinical symptom score of terbinafine hydrochloride group was 0 at 3w, and the decrease index of clinical symptom score (SSRI) reached 100% and lasted until 4 ws. In miconazole nitrate and cyclopyramidine group, the scores of clinical symptoms were 1 and 0 at 4 weeks, and the corresponding SSRI were 50% and 100%, respectively.
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.292

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本文編號(hào)：2303105