發(fā)布時(shí)間：2018-10-24 10:42

【摘要】：多年來(lái)人們通過(guò)對(duì)大豆抗?fàn)I養(yǎng)因子的深入的研究,發(fā)現(xiàn)多種幼齡動(dòng)物的屏障功能會(huì)受到日糧中大豆抗原蛋白的影響,限制了大豆在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)行業(yè)的利用率,進(jìn)而對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展會(huì)產(chǎn)生一定的損失。因此本論文利用體外模擬法,選取純化的β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物作為致敏原,以仔豬空腸上皮細(xì)胞為(IPEC-J2)模型,研究不同濃度的β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物作用IPEC-J2不同時(shí)間后,檢測(cè)其跨上皮細(xì)胞吸收規(guī)律并確定其轉(zhuǎn)運(yùn)方式,進(jìn)而通過(guò)染料木素和果寡糖來(lái)篩選有效的吸收抑制劑的作用濃度。為進(jìn)一步揭示大豆抗原蛋白的致敏機(jī)理奠定理論依據(jù)。試驗(yàn)Ⅰ仔豬小腸上皮細(xì)胞對(duì)大豆抗原蛋白吸收動(dòng)力學(xué)的研究本實(shí)驗(yàn)分別用濃度為0、0.25、0.5、1.0 mg/mLβ-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物處理IPEC-J2(0、2、4、8、12 h)后,收集Transwell下室的液體以及胞質(zhì)蛋白,分別用ELISA和Western blot對(duì)具有免疫活性的蛋白進(jìn)行定量和定性分析,將對(duì)應(yīng)的SDS-PAGE電泳條帶切膠,用Q-E質(zhì)譜對(duì)三條蛋白質(zhì)肽段進(jìn)行鑒定,結(jié)果顯示,隨著β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物濃度的增加,作用時(shí)間的延長(zhǎng),具有免疫活性的蛋白數(shù)量呈時(shí)間-劑量依賴性升高趨勢(shì)(P0.05),但隨著β-Conglycinin刺激濃度的增加及其酶解產(chǎn)作用時(shí)間的增加,胞質(zhì)中的蛋白的含量會(huì)出現(xiàn)顯著性下降(P0.05)。以上結(jié)果表明β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物是通過(guò)IPEC-J2胞質(zhì)后被腸道吸收,即屬于內(nèi)吞的轉(zhuǎn)運(yùn)方式。為了進(jìn)一步驗(yàn)證β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物是如何通過(guò)IPEC-J2胞質(zhì)內(nèi)吞作用,本試驗(yàn)將致敏原β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物稀釋成濃度為1 mg/mL后對(duì)細(xì)胞作用8 h,采用免疫熒光法檢測(cè)其細(xì)胞胞質(zhì)膜表面是否附著網(wǎng)格蛋白。結(jié)果表明:β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物處理后的細(xì)胞可見熒光沿細(xì)胞胞質(zhì)面分布,邊界清楚,呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),即屬于網(wǎng)格蛋白依賴性內(nèi)吞的轉(zhuǎn)運(yùn)方式。試驗(yàn)Ⅱ仔豬腸上皮細(xì)胞對(duì)大豆抗原吸收抑制物的篩選本實(shí)驗(yàn)將仔豬腸上皮細(xì)胞接種在Transwell上,在濃度為1.0 mg/mL的β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物的培養(yǎng)基中分別加入濃度為(0、6、12、18、24μg/mL)染料木素和(0、3、6、9、12μg/mL)果寡糖處理IPEC-J2 8 h后,分別收集Transwell下室的液體以及胞質(zhì)蛋白,利用ELISA和Western blot對(duì)具有免疫活性的蛋白進(jìn)行定量和定性分析。結(jié)果表明:添加同一種抑制劑時(shí),β-Conglycinin組的抑制效果低于酶解產(chǎn)物組(P0.05),同一種蛋白作為致敏原時(shí),添加染料木素組的抑制效果明顯低于添加果寡糖組。(P0.05)。下室中的β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物中僅剩下分子量為25KDa的肽段,胞質(zhì)蛋白中β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物中存在這30KDa、25KDa的肽段;。即果寡糖能有效的抑制酶解后大豆抗原蛋白的吸收。綜上所述:β-Conglycinin及其酶解產(chǎn)物處理IPEC-J2隨著作用時(shí)間和刺激濃度的增加,蛋白通過(guò)網(wǎng)格型依賴內(nèi)吞的轉(zhuǎn)運(yùn)方式跨上皮細(xì)胞后吸收量呈上升的趨勢(shì)。在此基礎(chǔ)上,添加適宜濃度的染料木素和果寡糖有助于抑制大豆抗原蛋白的吸收。以上研究結(jié)果為深入探討β-Conglycinin致敏機(jī)理提供理論依據(jù),同時(shí)也提高了大豆蛋白在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)行業(yè)的利用效率。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S828

【參考文獻(xiàn)】

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1 張?jiān)妶?趙元;劉丹丹;鮑男;趙寒冬;張迪;;日糧中大豆抗原蛋白檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J];大豆科學(xué);2015年03期

2 邢晶晶;劉海嬌;范路生;宋凱;陳彤;林金星;;植物細(xì)胞胞吞途徑及其研究方法[J];電子顯微學(xué)報(bào);2014年05期

3 范真真;陳虹;黃秉仁;;細(xì)胞內(nèi)吞的研究進(jìn)展[J];生命的化學(xué);2014年04期

4 王俊;潘麗;趙元;鮑男;秦貴信;;大豆抗原蛋白β-伴大豆球蛋白抗酶解肽的分離純化及其免疫活性鑒定[J];中國(guó)畜牧雜志;2012年23期

5 彭游;鐘嬋娟;鄧澤元;葉志剛;;植物雌激素染料木素的體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程研究進(jìn)展[J];食品科技;2011年08期

6 劉明美;趙國(guó)琦;;大豆抗原蛋白對(duì)幼齡動(dòng)物致敏作用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)飼料;2011年14期

7 王秋亞;高錦紅;;染料木素結(jié)構(gòu)修飾研究進(jìn)展[J];廣州化工;2010年11期

8 吳莉芳;鄒瑞興;王申;王洪鶴;孫澤威;秦貴信;;大豆主要抗原蛋白對(duì)埃及胡子鲇肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年06期

9 韓鵬飛;姜學(xué);馬曦;;大豆抗原蛋白研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧雜志;2009年19期

10 劉莉;李鑫;劉豐;鄧曉威;;大豆異黃酮對(duì)代謝綜合征模型大鼠抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的機(jī)制[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2008年12期

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2 王俊;β-伴大豆球蛋白及其酶解肽對(duì)仔豬腸上皮細(xì)胞完整性的影響[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 韓蕊;大豆球蛋白對(duì)仔豬小腸上皮細(xì)胞機(jī)械屏障功能的影響[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 韓景華;雙抗體夾心ELISA檢測(cè)大豆11S球蛋白方法的建立[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

5 鮑男;大豆抗原在仔豬小腸組織中分布規(guī)律的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

6 趙元;大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白在仔豬體內(nèi)消化動(dòng)力學(xué)的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

7 孫鵬;蒸汽處理對(duì)純化大豆抗原的含量及免疫原性的影響[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

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本文編號(hào)：2291160