【摘要】：黑色素細胞所合成色素的種類、數(shù)量及分布與被毛顏色密切相關(guān),本試驗對小鼠黑色素細胞進行體外分離培養(yǎng)并研究其生物學(xué)特性,篩選出研究基因功能的理想材料。試驗及結(jié)果如下：1.用0.25%Dispase酶Ⅱ和0.25%胰酶/0.02% EDTA分離到的小鼠黑色素細胞形態(tài)呈典型的多樹突狀或雙極形,樹突細長,伴有特殊生長暈。2.對傳代的4代、7代、10代和13代細胞經(jīng)多巴染色后發(fā)現(xiàn),細胞的胞質(zhì)、樹突和胞核均成棕褐色;用免疫細胞化學(xué)染色對細胞內(nèi)的S-100、MITF、TYR、TYRP1和TYRP2蛋白進行鑒定,發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)均有陽性信號,具有黑色素細胞的生物學(xué)特征。3.用qRT-PCR檢測不同代數(shù)細胞中MITF、TYR和TYRP1 mRNA的表達水平,結(jié)果顯示：與4代細胞相比,7、10代細胞內(nèi)基因表達量變化不大；而13代細胞中TYR和TYRP1表達量顯著升高,具有黑色素瘤細胞的特征。4.用iCelligence實時檢測不同代數(shù)細胞的貼壁和增殖,結(jié)果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)2h后,各代細胞均開始貼壁增殖;培養(yǎng)40 h后,4、7、10代細胞增殖基本達頂峰,之后細胞數(shù)減少,而13代細胞可維持到100 h左右,之后細胞數(shù)維持恒定,其增殖力比其他3個代數(shù)細胞強,具有黑色素瘤細胞的特征。5.在13代細胞培養(yǎng)基中加入a-MSH,培養(yǎng)72h, MITF、TYR和TYRP2 mRNA表達水平分別是對照組的1.528、4.623和1.489倍。結(jié)論：13代細胞具有較強的增殖能力且TYR基因的表達量顯著升高,可能轉(zhuǎn)化為黑色素瘤細胞。因此,10代前的小鼠黑色素細胞是研究黑色素形成過程的理想材料。
[Abstract]:The species, quantity and distribution of melanocytes were closely related to the color of the coat. In this experiment, the melanocytes of mice were isolated and cultured in vitro and their biological characteristics were studied, and the ideal materials for studying gene function were screened out. The results are as follows: 1. The melanocytes isolated from mice with 0.25%Dispase 鈪，

本文編號：2278013