【摘要】：為建立同時檢測非洲豬瘟病毒(ASFV)、豬瘟病毒(CSFV)和高致病性豬繁殖與呼吸道綜合征病毒(HP-PRRSV)的方法,本研究根據(jù)ASFV CP530R基因、CSFV 5'UTR基因和HP-PRRSV NSP2基因,分別設計了3對特異性引物和Taq Man水解探針,建立了同時檢測這3種病毒的多重熒光定量RT-PCR方法,并對其反應條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明,該方法僅對ASFV、CSFV和HP-PRRSV呈現(xiàn)特異性擴增,不與偽狂犬病毒、豬細小病毒和豬圓環(huán)病毒2型的DNA以及豬流行腹瀉病毒和豬流感病毒的c DNA發(fā)生交叉反應;該方法對ASFV、CSFV和HP-PRRSV的最低檢出量分別為61拷貝/μL、11拷貝/μL和41拷貝/μL;組內(nèi)和組間重復性試驗的Ct值變異系數(shù)均小于2.5%,具有良好的重現(xiàn)性。用該方法對276份臨床樣品進行ASFV、CSFV和HP-PRRSV的檢測,所有樣品的ASFV檢測結(jié)果均為陰性,CSFV檢測單陽性樣品6份,HP-PRRSV檢測單陽性樣品22份,CSFV和HP-PRRSV檢測雙陽性樣品4份。本研究建立的方法為臨床樣品中ASFV、CSFV和HP-PRRSV的同時檢測提供了一種快速、敏感和特異的技術(shù)手段。
[Abstract]:In order to establish a method for simultaneous detection of African classical swine fever virus (ASFV),) (CSFV) and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV), the present study was based on ASFV CP530R gene, CSFV 5'UTR gene and HP-PRRSV NSP2 gene. Three pairs of specific primers and Taq Man hydrolyzed probes were designed, and a multiplex fluorescence quantitative RT-PCR method was established for simultaneous detection of the three viruses, and the reaction conditions were optimized. The results showed that the method was only specific for ASFV,CSFV and HP-PRRSV, and did not cross react with pseudorabies virus, porcine parvovirus and porcine circovirus type 2 DNA and porcine epidemic diarrhea virus and swine influenza virus c DNA. The minimum detectable quantities of ASFV,CSFV and HP-PRRSV were 61 copies / 渭 L 11 copies / 渭 L and 41 copies / 渭 L, respectively, and the coefficients of variation of Ct values in intra-group and inter-group reproducibility tests were less than 2.5 copies / 渭 L, respectively, with good reproducibility. The method was used to detect ASFV,CSFV and HP-PRRSV in 276 clinical samples. The results of ASFV detection in all samples were negative. Six samples were positive for HP-PRRSV. 22 samples were positive for HP-PRRSV and four samples were double positive for HP-PRRSV. This method provides a rapid, sensitive and specific technique for simultaneous detection of ASFV,CSFV and HP-PRRSV in clinical samples.
【作者單位】： 天津出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心;
【基金】：天津市科技支撐計劃項目(13ZCZDNCO1300)
【分類號】：S852.651

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本文編號：2260121